我国登革2型病毒E基因的克隆与表达研究

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zeldaok
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以我国登革2型病毒43(D2-43)株RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增了E基因。扩增的cDNA片段约1290bp,与预期大小相一致,经Hind Ⅲ酶切鉴定和Southern印迹杂交证实了E基因片段的特异性。将E基因的扩增片段首先克隆到pBluescript Ⅱ KS+质粒DNA中,利用重组子中载体的酶切位点,将该基因片段再克隆到高效表达载体pBV220中。用PCR技术从20个重组子中筛选出6个阳性克隆,经Sal Ⅰ和Pst Ⅰ酶切进一步鉴定,证明这6个重组质粒中均含有E基因片段。采用温控诱导,4小时表达的蛋白量约占菌体总蛋白的20%。经Western blot分析证明,表达的蛋白可与该病毒株的多克隆腹水抗体和登革2型病毒标准株的单克隆抗体起特异反应。

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