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提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为11.85μg/mL,血清样品稀释倍数为1:20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1:1000,抗原抗体最佳结合时间为1h,血清与二抗最适反应时间为45 min。试验结果确定的判定标准为:样品OD490nm≥0.639判定为阳性,OD490nm≤0.350判定为阴性,介于二者之间的为可疑。试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7%(24/205)。该研究为ORT的诊断提供了一种敏感性高、特异性强、简便、易行的方法。