【摘 要】
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针对龙眼遗传转化传统方法存在转化效率低、周期长、转化的胚状体再生困难以及转化植株生长异常等问题,以龙眼土播实生幼苗为受体材料,采用去顶芽(保留真叶)和去顶法(切除带
【机 构】
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福建农林大学园艺植物生物工程研究所 福州350002
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针对龙眼遗传转化传统方法存在转化效率低、周期长、转化的胚状体再生困难以及转化植株生长异常等问题,以龙眼土播实生幼苗为受体材料,采用去顶芽(保留真叶)和去顶法(切除带叶的上部)进行创伤,利用根癌农杆菌介导法侵染伤口,通过抗性筛选获得正常生长发育的再生植株,经PCR扩增、目标片段测序及qRT-PCR检测鉴定阳性转化植株.结果显示,去顶芽法获得的抗性芽GUS基因阳性检测率33.84％、特异片段(35S-mft-intron)的阳性率为20.83％,去顶法获得的抗性芽GUS基因阳性检测率32.5％;经测序验证,PCR扩增产物的序列与载体特异片段的相似度为100％,外源基因已经整合到龙眼基因组中;qRT-PCR表明外源基因在转基因龙眼植株中表达量较高,在未转化龙眼植株中不表达,说明外源基因在龙眼植株内进行转录,建立了一种龙眼快速转基因方法.该方法可快速获得大量转基因植株,具有操作简便、成本低、周期短、转化效率较高、成活率高、可周年生产等优点,对龙眼的基因功能研究和种质创新具有重要的意义.
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