绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定

来源 :复旦学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：redfox1234

【摘要】

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绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋

【作者】

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胡业辉李益鹏王紫英陈勖任真丁澦

【机构】

：

复旦大学生命科学学院生理学与生物物理学系

【出处】

：

复旦学报(自然科学版)

【发表日期】

：

2019年2期

【关键词】

：

荧光蛋白绿色荧光蛋白结合蛋白纳米抗体蛋白表达蛋白纯化微量热泳动

【基金项目】

：

国家自然科学基金(31470764);国家基础学科拔尖学生培养试验计划

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绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和MonoQ阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测G

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