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目的构建一含绿荧光蛋白报告基因(gfp)的防龋基因疫苗,利用绿荧光蛋白特有的发光性质,示踪防龋基因疫苗在体外的表达情况.方法 采用PCR方法,以质粒pPC41为模板,扩增变形链球菌表面蛋白质抗原(PAC)分子的氨基端A区(pacA),以此作为基因防龋疫苗的目的基因片段,与质粒pEGFP-C1重组构建重组质粒pEGFPC1-pacA,并经酶切、测序鉴定;重组质粒瞬时转染COS1细胞后,通过荧光显微镜直接观察发绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测转染细胞的荧光强度,RT-PCR扩增pacA基因片段检测重组质粒的体外