【摘 要】
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从J亚群禽白血病病毒(ALV-J) HB09JY03株感染的DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出约720 bp的gag-p27基因片段,克隆至pMD18-T载体.鉴定正确后,将该片段克隆至p
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,山东农业大学
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从J亚群禽白血病病毒(ALV-J) HB09JY03株感染的DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出约720 bp的gag-p27基因片段,克隆至pMD18-T载体.鉴定正确后,将该片段克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导表达.表达产物经His TrapTM HP纯化后,测蛋白浓度达到9mg/mL.用兔抗自然p27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组p27蛋白有抗原反应活性.免疫新西兰大白兔后,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应.所制备的重组p27蛋白和多克隆抗体将在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值.
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