PAI-1糖基化位点突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达

来源 :上海医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:f360358188
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Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)是一种Mr为50×103的单链糖蛋白,有379个氨基酸残基,3个N型糖基化位点。构建PAI-1糖基化突变体,以便研究糖链的功能。用寡核苷酸定位突变技术将3个糖基化位点209,265,329位进行突变,把3个糖基化位点都发生了突变的PAI-1cDNA组装到真核表达载体pSV2中,得到真核表达质粒pZH-p1-M3E;在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr-)中进行短暂表达,用发色底物法和夹心ELISA方法检测培养液中PAI-1的活性和含量。结果:糖基化位点突变的PAI-1能在CHO细胞中表达,但表达水平及活性较低。非糖基化PAI-1的活性和抗原分别为4.34IU/ml和3.15μg/L结论:用寡核苷酸定位突变方法获得了PAI-1糖基化突变体,并且在CHO细胞中得到表达。
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