【摘 要】
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目的:构建含肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺病毒的细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,
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目的:构建含肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺病毒的细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞载体,并初步观察其抗肝癌能力。方法:分离外周血淋巴细胞,进行CIK细胞培养及表型鉴定;构建携带CD40L启动子的慢病毒载体pLentihCD40L-E1AB及重组腺病毒载体pAd5/F35-TRAIL,两步法感染CIK细胞;应用ELISA、MTT、小管形成实验及软琼脂克隆形成实验观察双病毒感染后CIK细胞的分泌功能、体外增殖能力变化以及对血管生成能力和对肝癌细胞集落形成能力的影响。结果:CIK细胞生长旺盛,双染色结果显示CD3、CD56、CD11a和CD226为阳性,CD8和CD305为阴性。成功获得了具有hCD40L启动子活性及腺病毒E 1基因的慢病毒pLenti-hCD40LE1AB,同时成功构建了重组腺病毒载体pAd5/35-TRAIL。功能学检测结果显示,感染Ad5/35-TRAIL和pLentihCD40L-E1AB两种病毒的CIK细胞中干扰素γ表达水平升高(P<0.05),血管生成及肝癌细胞集落形成能力受到明显抑制,但对CIK细胞自身增殖能力的影响较小。结论:成功构建了携带腺病毒并表达TRAIL基因的CIK细胞,并初步观察到该CIK细胞对肝癌细胞生长具有一定的抑制作用。
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