新型鹅星状病毒荧光定量PCR方法的建立及应用

来源 :中国家禽 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mm315
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为建立一种准确快速检测新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的方法,研究以GAstV毒株JS20为模板,根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物,在构建重组质粒pGEMT-GAstV的基础上,建立了检测GAstV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法。结果显示:阳性对照重组质粒pGEMT-GAstV在1.087×101~1.087×108拷贝/μL浓度之间与qRT-PCR的Ct值呈现良好的线性关系;该qRT-PCR对所检测的鸡星状病毒(cASTV)、禽腺病毒(FAdV)、小鹅瘟病毒(GPV)以及鸭坦布苏病毒(DTMUV)均无交叉反应;检测灵敏度为1.087×101拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1.6%。利用该q RT-PCR方法对在鹅胚及LMH细胞上繁殖不同代次的JS20病毒载量进行检测发现,JS20在鹅胚上的扩增效率更高,病毒载量可达108~109拷贝/mL。对江苏不同地区26份临床样品进行检测发现,该q RT-PCR方法的阳性检出率为73.08%,而普通PCR方法阳性检出率仅为42.30%。结果表明建立的新型GAstV qRT-PCR具有很好的特异性及灵敏度,且在新型GAstV定量分析及临床样品检测诊断中展示了良好的应用前景。
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