【摘 要】
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目的 观察不同年龄段大鼠血清对骨髓内皮祖细胞向成熟内皮细胞诱导分化的影响.方法 无菌取1-2月龄、19-26月龄Sprague-Dawley大鼠股骨和胫骨,获取骨髓单个核细胞,用含20%胎牛
【机 构】
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第三军医大学新桥医院全军心血管内科研究所
【基金项目】
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军队杰出人才基金;国家自然科学基金
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目的 观察不同年龄段大鼠血清对骨髓内皮祖细胞向成熟内皮细胞诱导分化的影响.方法 无菌取1-2月龄、19-26月龄Sprague-Dawley大鼠股骨和胫骨,获取骨髓单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,经差速贴壁法对二次贴壁细胞在纤维连接蛋白包被的培养板或培养瓶进行体外培养,以DiI-ac-LDL、FITCUEA-1 双荧光染色和FITC-CD31染色进行鉴定;收集制备相应年龄段(1～2月龄、19～26月龄)大鼠血清,将内皮祖细胞分为老年大鼠内皮祖细胞+老年大鼠血清组、老年大鼠内皮祖细胞+年轻大鼠血清组、年轻大鼠内皮祖细胞+老年大鼠血清组、年轻大鼠内皮祖细胞+年轻大鼠血清组.体外培养的内皮祖细胞经含20%不同年龄段大鼠血清的内皮条件培养基诱导培养后,激光共聚焦显微镜检测DiI-acLDL、FTTC-UEA-1双染色阳性率,免疫组织化学检测假血友病因子表达、逆转录聚合酶链反应分别检测内皮一氧化氮合酶、血管内皮生长因子受体2表达,体外血管生成实验观察内皮祖细胞参与管形生成能力.结果 年轻大鼠血清显著提高老年大鼠内皮祖细胞在内皮条件培养基诱导培养后的DiI-acLDL、FTTC-UEA-1双染色阳性率(P＜0.05),而老年大鼠血清显著降低年轻大鼠内皮祖细胞双染阳性率(P＜0.05);年轻大鼠血清明显促进老年大鼠内皮祖细胞在内皮条件培养基诱导培养后的血管性血友病因子、内皮型一氧化氮合酶(P＜0.01)及血管内皮生长因子受体2表达(P＜0.05);年轻大鼠血清显著减少内皮条件培养基诱导培养后未参与血管生成的老年大鼠内皮祖细胞数(P＜0.05).结论 年轻大鼠血清可显著增强老年大鼠内皮祖细胞向内皮细胞诱导分化的能力,而老年大鼠血清可部分抑制年轻大鼠内皮祖细胞向成熟内皮细胞诱导分化;年轻大鼠血清中可能存在激发衰老个体内皮祖细胞活力的系统性血清因子,这些因子可增强衰老个体来源的内皮祖细胞内在分化潜能.
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