【摘 要】
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目的 验证Cyclin D1及其下游信号蛋白对成骨细胞增殖的调控作用,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制.方法 培养成骨样细胞株UMR-106,运用CRISPR/Cas9技术敲减Cyclin D1
【机 构】
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福建中医药大学,福建福州,350122
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目的 验证Cyclin D1及其下游信号蛋白对成骨细胞增殖的调控作用,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制.方法 培养成骨样细胞株UMR-106,运用CRISPR/Cas9技术敲减Cyclin D1基因后,将细胞分为基因敲减+生理盐水组(组1)、基因敲减+健骨颗粒组(组2)、病毒空载体细胞(组3,阴性对照).未行基因敲减的细胞分为正常细胞+生理盐水组(组4)和正常细胞+健骨颗粒组(组5).分别用生理盐水血清或健骨颗粒含药血清干预各组细胞24、48、72 h,通过CCK8法检测细胞增殖情况,利用Real time PCR检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK 2、CDK 4、Rb及E2F-1基因的表达水平.结果 经Western-bolt检测表明基因敲减的成骨细胞Cyclin D1蛋白表达明显下降.CCK8法检测结果显示,与组4相比,组5增殖速度变快(P＜0.05),组3增殖速度无差异(P＞0.05),组1和组2增殖速度均减慢(P＜0.05);与组5相比,组2增殖速度减慢(P＜0.01);与组1相比,组2增殖速度无统计学意义(P＞0.05).Real time PCR检测结果显示,与组4相比,组5 Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin E、Rb及E2F-1 mRNA的表达明显增高(P＜0.05或P＜0.01),组3表达无统计学意义(P＞0.05),组1和组2表达明显降低(P＜0.05或P＜0.01);与组5相比,组2增殖速度减慢(P＜0.01);与组1相比,组2无统计学意义(P＞0.05).结论 Cyclin D1及其下游信号蛋白是调控成骨细胞增殖的关键因素;健骨颗粒可以通过调节Cyclin D1及其下游信号蛋白促进成骨细胞增殖.
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