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目的
探讨自噬在高糖诱导足细胞脂质代谢中的作用及分子机制。
方法(1)体外培养人永生化足细胞(human podocytes,HPC),分成正常对照组、高糖组和甘露醇组。油红O染色及细胞脂质含量测定观察高糖对足细胞脂质蓄积的影响;Western印迹检测脂质代谢相关分子胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)表达水平。(2)体外培养HPC细胞,分成正常对照组、高糖组、高糖+3-MA(3-methyladenine,3-MA)组和甘露醇组。吖啶橙染色观察各组自噬体的形成,Western印迹检测自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达水平,油红O染色及细胞脂质含量测定观察脂质蓄积程度,Western印迹检测脂质代谢相关分子SREBP-1表达水平。
结果(1)与正常对照组相比,高糖可诱导细胞内脂质蓄积增加,脂质代谢相关分子SREBP-1表达上调(P<0.05);正常对照组与甘露醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,高糖组自噬体增多,自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达上调(均P<0.05);3-MA预处理抑制自噬,自噬体明显减少,自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达下调(均P<0.05),胞内脂质蓄积减少(P<0.05),脂质代谢相关分子SREBP-1表达下调;上述指标在正常对照组与甘露醇组间差异无统计学意义(均P>0.05)。
结论自噬可能通过影响SREBP-1表达参与高糖诱导的足细胞脂质蓄积过程,抑制自噬可有效改善高糖诱导的足细胞脂质蓄积。