【摘 要】
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背景:骨质疏松是一种以骨量减少、骨微结构改变为主要特征的全身性代谢疾病,现有的药物治疗效果有限且不良反应明显,而骨髓间充质干细胞来源外泌体因其非免疫原性等优势,有望成为治疗骨质疏松的新方法.目的:探讨褪黑素预处理骨髓间充质干细胞后提取的外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及作用机制,分析其作为无细胞方式促进成骨治疗骨质疏松的可行性.方法:采用全骨髓贴壁法分离大鼠原代骨髓间充质干细胞并鉴定;超高速离心法提取骨髓间充质干细胞中的外泌体(NC-Exos)和褪黑素预处理骨髓间充质干细胞中的外泌体(MT-Exos
【机 构】
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锦州医科大学附属第一医院,辽宁省锦州市 121000;中国科学院大学重庆医院,重庆市 400013;北京市创伤骨科研究所,北京积水潭医院,北京市 100035
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背景:骨质疏松是一种以骨量减少、骨微结构改变为主要特征的全身性代谢疾病,现有的药物治疗效果有限且不良反应明显,而骨髓间充质干细胞来源外泌体因其非免疫原性等优势,有望成为治疗骨质疏松的新方法.目的:探讨褪黑素预处理骨髓间充质干细胞后提取的外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及作用机制,分析其作为无细胞方式促进成骨治疗骨质疏松的可行性.方法:采用全骨髓贴壁法分离大鼠原代骨髓间充质干细胞并鉴定;超高速离心法提取骨髓间充质干细胞中的外泌体(NC-Exos)和褪黑素预处理骨髓间充质干细胞中的外泌体(MT-Exos)并鉴定;共聚焦显微镜下观察骨髓间充质干细胞对外泌体的摄取情况.骨髓间充质干细胞在成骨诱导培养基中培养,分别以MT-Exos和NC-Exos处理骨髓间充质干细胞,以PBS处理骨髓间充质干细胞为空白对照组.采用碱性磷酸酶活性、茜素红染色评估各组骨髓间充质干细胞成骨分化效果,Western blot和RT-qPCR分别检测各组骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2的蛋白和mRNA表达;Western blot检测骨髓间充质干细胞中Wnt1和β-catenin的蛋白表达.结果 与结论:①骨髓间充质干细胞呈典型纺锤样形态且具备三系分化能力;外泌体的直径大多数小于150 nm,且均表达外泌体特异性标记蛋白CD9、CD63和CD81,能够被骨髓间充质干细胞摄取;②成骨诱导7 d后,相较于NC-Exos处理组,MT-Exos处理组显示出更高的碱性磷酸酶活性(P<0.01),碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2的蛋白和mRNA表达(P<0.05),Wnt1、β-catenin蛋白表达(P<0.001);③成骨诱导14 d后,相较于NC-Exos处理组,MT-Exos处理组显示出更多的红色钙结节;④上述实验结果表明,MT-Exos通过激活Wnt1/β-catenin信号通路显著促进骨髓间充质干细胞成骨分化.
其他文献
背景:近年来利用环状RNA(circRNA)调控干细胞分化成为新的研究热点,将circRNA负载于骨髓间充质干细胞研究其成骨性能,为研发骨缺损修复新型材料具有重要意义.目的:探讨敲低circRNA mmu_circ_0001775对骨髓间充质干细胞成骨能力的影响.方法:生物信息学分析工具推测miR-335-5p关系最为密切的上游circRNA为mmu_circ_0001775,将敲低mmu_circ_0001775的慢病毒、阴性对照病毒转染至骨髓间充质干细胞.qRT-PCR检测各组细胞成骨诱导7,14 d
背景:老化伴随着多个器官结构和功能的进行性下降,动脉血管的结构和功能在老化过程中受到损害.目的:观察增龄对动脉管壁超微结构的影响.方法:成年SD大鼠5只及老年SD大鼠5只,在大鼠麻醉状态下取髂总动脉,放入戊二醛中固定,利用透射电子显微镜观察髂总动脉内膜和中膜的超微结构.结果 与结论:①成年大鼠髂总动脉内皮细胞间的连接正常;老年大鼠髂总动脉内皮细胞连接间出现较大的间隙;②成年大鼠髂总动脉中膜平滑肌细胞为收缩表型,细胞外基质中有较多的弹性纤维;老年大鼠髂总动脉平滑肌细胞为合成表型,细胞外基质中胶原纤维明显增多
背景:节段性骨缺损容易发生不愈合,其治疗是一个巨大的临床挑战.此外,人口老龄化和骨质疏松症相关骨折的增加使得有必要进一步探索这类成骨不良人群骨折愈合的新方法.目的:评估负载骨髓间充质干细胞的富血小板血浆移植结合体外冲击波这种新型联合治疗策略在骨质疏松性骨缺损重建中的作用.方法:将经过体外冲击波预处理的骨髓间充质干细胞与富血小板血浆共培养,通过CCK-8和活死染色法检测细胞生物相容性,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色和RT-PCR检测细胞成骨分化能力.建立骨质疏松新西兰大白兔模型,并制备桡骨节段性骨缺损,使用
背景:制备可降解材料骨组织工程支架,应用于修复骨肉瘤造成的骨缺损是当前骨组织工程研究热点.目的:确定壳聚糖/聚乳酸/羟基磷灰石/聚乙烯醇复合材料的配比,优化骨支架力学性能.方法:基于挤出式3D打印技术制备壳聚糖/聚乳酸/羟基磷灰石/聚乙烯醇骨支架,以最大抗压强度为评价指标,设计正交实验,以乙酸浓度(1.5％,2％,2.5％,3％)、壳聚糖溶液浓度(2％,3％,4％,5％)、羟基磷灰石:聚乳酸质量比(1:5,1:6,1:7,1:8)、羟基磷灰石/聚乳酸:壳聚糖溶液:聚乙烯醇凝胶质量体积比(1 g:1 g:0
背景:脂肪间充质干细胞衍生外泌体(adipose-derived mesenchymal stem cells released exosomes,AMSC-Exos)中miR-126-3p可作为糖尿病的一种潜在生物标志物,但其对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用及其相关机制研究较少.目的:探究AMSC-Exos中miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的效用及作用机制.方法:①以30 mmol/L葡萄糖与100μmol/L棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞糖脂毒性体外模型;②收集第4代脂肪间充质干细胞上清液提
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背景:糖尿病溃疡作为糖尿病的常见并发症之一,其低愈合率和高截肢率已严重危害人类健康,尽管目前多种中医外用膏药已证实能促进创面愈合,但其发挥作用的分子机制尚未明确.目的:探讨石香膏治疗糖尿病溃疡创面的可能作用机制.方法:将40只清洁级雄性SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病溃疡组、细胞生长因子组、石香膏组,每组10只.除正常对照组外,其余3组均制备糖尿病大鼠模型;1周后4组均采用全层皮肤缺损法制备溃疡创面模型.造模成功1周后,石香膏组、细胞生长因子组分别给予外用细胞生长因子及外敷石香膏干预,糖尿病溃疡组及正常对
背景:经皮椎体强化治疗后残余痛是影响患者生活质量的严重并发症之一,也是困扰临床医生的难题.目前已有一些研究分析了椎体强化治疗后残余痛的危险因素,但不够全面且发生机制不甚清晰.目的:分析骨质疏松性胸腰椎压缩骨折椎体强化治疗后残余痛的危险因素,并探讨其发生机制.方法:选择2019年10月至2021年1月在江苏省苏北人民医院脊柱外科接受经皮椎体强化治疗的骨质疏松性椎体压缩骨折的患者共217例.术后1周及术后1,3,6个月内任意一次随访目测类比评分≥4分则认为有术后残余痛,依据有无残余痛的情况分为残余痛组(n=3
背景:临床上高氧导致的高氧性急性肺损伤越来越受到人们的关注.研究显示,沙丁胺醇能够减轻大鼠的炎性反应,提高多种抗氧化物质的活性,改善微循环,从而减轻肺水肿的程度,对肺组织起到一定的保护作用.目的:探究沙丁胺醇减轻高氧性急性肺损伤的效果及其作用机制.方法:将SD大鼠分为对照组、不同时间高氧处理肺损伤模型组和不同剂量沙丁胺醇雾化给药治疗组(0.025,0.05,0.1,0.2,0.4 mg/kg).通过测定各项生化指标确定最佳的高氧(>95％)处理时间和沙丁胺醇使用剂量;随后分别用qRT-PCR、Wester
背景:酒精性股骨头坏死与饮酒具有高度的相关性,然而其具体发病机制尚不明确且存在一定的个体差异.目的:构建酒精性股骨头坏死的基因网络图谱,进一步探索酒精性股骨头坏死的潜在发病机制.方法:从广西中医药大学第一附属医院骨二科招募3例酒精性股骨头坏死患者和3名健康志愿者,通过对其外周血进行基因测序筛选具有差异表达的mRNA和lncRNA,通过预测lncRNA-miRNA和miRNA-mRNA的相互作用靶点,使用cytoscape软件构建竞争性内源RNA调控网络.结果 与结论:①通过差异表达分析从酒精性股骨头坏死样