【摘 要】
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目的探讨转染克老素(KL)基因对成骨细胞活性的影响。方法提取原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)并培养,用倒置显微镜观察BMSCs形态。BMSCs培养至第三代时做流式鉴定,之后换为诱导
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目的探讨转染克老素(KL)基因对成骨细胞活性的影响。方法提取原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)并培养,用倒置显微镜观察BMSCs形态。BMSCs培养至第三代时做流式鉴定,之后换为诱导培养基培养14~21 d,诱导为成骨细胞,用茜素红染色鉴定是否诱导成功。通过重组腺相关病毒(r AAV)介导小鼠KL基因转染成骨细胞。实验分为五组:空白对照组(control组),KL转染组(KL组),klotho转染+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(KL+BGJ398组),空载体组(r AAV组),空载体+FGFR1抑制剂(BGJ398)组(r AAV+BGJ398组)。分组处理72 h后,荧光倒置显微镜观察成骨细胞腺病毒表达情况,RT-PCR检测成骨细胞的KL mRNA的表达,ELISA检测上清液KL蛋白的含量;RT-PCR检测成骨细胞分泌物:骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达。结果成功提取原代骨髓间充质干细胞,并且成功向成骨方向诱导。通过r AAV转染KL后,成骨细胞高表达外源性KL蛋白(P<0.01),并在KL-FGF23-FGFR1通路正常的情况下可显著促进成骨细胞分泌OCN(P<0.05),显著抑制成骨细胞分泌OPN(P<0.05)。结论 KL可以促进成骨细胞的活力,可能是通过KL-FGF23-FGFR1通路发挥作用。
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