嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位。结果显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1慢病毒载体,用5μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P<0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显著增加了细胞脂滴含量(P<0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上。结果表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据。