【摘 要】
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目的：利用家蚕表达系统表达含蛋白转导肽P11的人血清对氧磷酶1（paraoxonase 1，PON1）融合蛋白，并对其抗敌敌畏（dichlorvos，DDVP）毒性的生物活性进行初步研究。方法 P11-PON1融合基因构
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所,解放军总医院妇产科,内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院骨一科,浙江大学动物科学院蚕蜂科学研究所 吴小峰
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目;北京市自然科学基金资助项目
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目的：利用家蚕表达系统表达含蛋白转导肽P11的人血清对氧磷酶1（paraoxonase 1，PON1）融合蛋白，并对其抗敌敌畏（dichlorvos，DDVP）毒性的生物活性进行初步研究。方法 P11-PON1融合基因构建于家蚕表达载体pFastBac 5B多克隆位点，转化家蚕DH10BmBac 感受态细胞，收集病毒粒子并感染家蚕5龄幼虫，感染96 h 后，收获蛋白；SDS-PAGE 电泳分析P11-PON1融合蛋白占家蚕总蛋白比例，计算蛋白含量；利用小鼠和斑马鱼鉴定P11-PON1融合蛋白抗DDVP毒性的生物活性；每只小鼠灌胃或直肠给P11-PON1融合蛋白1mg，给药后立刻和3 h后，腹腔注射DDVP溶液20 mg/kg，观察小鼠中毒状态，计算存活率；P11-PON1融合蛋白溶于斑马鱼养殖水中，浓度分别为1、2.5、5、10和20 mg/L，给药后立刻和3 h 后加入终浓度为50 mg/L的DDVP溶液染毒，观察斑马鱼的行为变化，计算存活率。结果成功表达了P11-PON1融合蛋白，该蛋白占家蚕5龄虫总蛋白的8%；灌胃给予P11-PON1融合蛋白没有提高染毒小鼠的存活率；直肠给药后立刻染毒也没有显著提高小鼠存活率，而直肠给药3 h后再腹腔注射DDVP染毒，小鼠存活率显著提高（P
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