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目的优化甲醇酵母表达系统，提高B27K—DTrI前体表达量。方法用不同浓度的G418 YPD平板、联合Real—time PCR筛选高拷贝菌株。优化高拷贝菌株的最佳起始诱导吸光度A、诱导时间、诱导剂浓度等表达条件。结果筛选到高拷贝菌株S3菌，最佳诱导条件为诱导起始A600约6．0，甲醇诱导浓度0．75％，诱导时间72h，目的蛋白表达量118mg／L。结论通过条件优化实验，为人胰岛素B27K的产业化提供了可靠的实验基础。