【摘 要】
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目的:构建稳定表达AKR1C3基因的人前列腺癌细胞株DU145-AKR1C3,探讨AKR1C3基因对DU145细胞增殖的影响.方法:构建携带AKR1C3基因的重组慢病毒载体pEZ-LV201-AKR1C2和对照质粒p
【机 构】
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广州市南沙中心医院,广东 广州,511455
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目的:构建稳定表达AKR1C3基因的人前列腺癌细胞株DU145-AKR1C3,探讨AKR1C3基因对DU145细胞增殖的影响.方法:构建携带AKR1C3基因的重组慢病毒载体pEZ-LV201-AKR1C2和对照质粒pEZ-LV201-NC,并包装相应的慢病毒,用病毒感染低表达AKR1C3基因的DU145细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定细胞克隆DU145-AKR1C3和DU145-NC;采用实时荧光定量PCR和Western-Blot法分别检测稳定细胞株中AKR1C3的mRNA、蛋白表达水平;CCK-8法用于检测细胞增殖能力的改变.结果:成功构建了重组慢病毒表达质粒pEZ-LV201-AKR1C3和pEZ-LV201-NC,并制备了相应的慢病毒;经嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株DU145-AKR1C3和DU145-NC;DU145-AKR1C3细胞中AKR1C3基因的mRNA和蛋白水平显著升高;相对母细胞DU145和DU145-NC对照组,DU145-AKR1C3细胞在接种2 d后开始出现明显的生长加快(P<0.05).结论:AKR1C3基因过表达可以促进人前列腺癌细胞DU145细胞的增殖.
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