【摘 要】
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目的 建立荧光实时定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测前列腺癌(Pca)特异基因DD3 mRNA的方法.方法 在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条TaqMan-MGB探针,优化反应体系,建立DD
【机 构】
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温州医学院附属第一医院检验科,温州医学院附属第一医院泌尿外科
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目的 建立荧光实时定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测前列腺癌(Pca)特异基因DD3 mRNA的方法.方法 在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条TaqMan-MGB探针,优化反应体系,建立DD3 mRNA的FQ-RT-PCR方法,并进行方法学评价.将PCR扩增产物经凝胶电泳纯化后与pBluescriptⅡSK载体连接,再将重组质粒转化感受态细胞进行克隆;提取重组质粒在紫外分光光度计上定量,作为定量检测的标准品.结果 重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pBluescriptⅡSK-DD3cDNA克隆成功.PCR扩增产物经测序分析证实为DD3 mRNA特异性片段.本法灵敏度为6拷贝/反应,线性范围为6～6×108拷贝/反应,相关系数为0.9985,批内、批间变异系数分别为1.0%～2.0%和1.3%～6.6%.结论 成功建立了FQ-RT-PCR检测DD3 mRNA的方法.为DD3 mRNA作为前列腺癌的诊断指标提供了方法学依据,也为其他肿瘤基因的检测提供了方法学启示.
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