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目的：构建人核糖体蛋白RPS3及其Ser209突变体的真核表达载体，初步探讨RPS3Ser209突变体对NF－κB转录活性及其DNA结合能力的影响。方法采用高保真PCR扩增RPS3的CDS序列，克隆入pcDNA－3．1myc－HisB载体，构建RPS3－myc表达载体。以构建成功的RPS3－myc质粒为模板，采用点突变方法构建RPS3Ser209突变体RPS3S209A－myc表达载体。报告基因实验检测RPS3及RPS3S209A对NF－κB转录活性的影响；共聚焦显微镜观察RPS3及RPS3S209A的细胞定位；EMSA 实验检测 RPS3及RPS3S209A的 DNA结合能力。结果成功构建RPS3－myc及RPS3S209A－myc真核表达载体，与野生型RPS3相比，RPS3S290A入核显著减少，其对NF－κB的激活显著降低，对NF－κB的DNA结合能力的影响显著下降。结论核糖体蛋白RPS3在NF－κB信号通路中的作用依赖于其第209位丝氨酸。