β趋化因子通过小胶质细胞活化引起小鼠感光细胞凋亡的实验研究

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目的 观察β趋化因子对小鼠小胶质细胞的活化及诱导感光细胞凋亡的作用.设计实验性研究.研究对象β趋化因子、小鼠BV-2小胶质细胞系及661w感光细胞系.方法 将β趋化因子(RANTES、MIP-lcα及MIP-1β)加入到BV-2细胞中,观察BV-2细胞活化反应.然后将被激活的BV-2细胞培养液上清加入661w细胞中,观察661w的凋亡情况.或将β趋化因子直接加入到661w细胞中,观察其凋亡情况.事先加入β趋化因子抑制剂met-RANTES后,重复上述操作.主要指标钙内流、ROS及NO的产生、TUNEL阳性感光细胞百分比.结果 β趋化因子加入BV-2细胞后,细胞内钙流曲线明显上升、细胞外ROS及NO产生较对照组均明显增高(P<0.01);将激活后的BV-2细胞上清加入到661w细胞中,后者凋亡率增加30%.β趋化因子直接加入661w细胞中,上述指标无明显变化.在加入β趋化因子之前先加入其抑制剂met-RANTES,BV-2细胞的ROS产生较未加抑制剂组明显降低(P<0.01)、NO产生较未加抑制剂组降低(P=0.0187),661w细胞凋亡明显减少.结论 β趋化因子可活化小鼠小胶质细胞导致感光细胞凋亡.β趋化因子抑制剂可抑制遗传性视网膜变性小鼠小胶质细胞活化,保护感光细胞.“,”Objective To observe the activation of microglia and the photoreceptor cell apoptosis of mice induced by β-chemokines in vitro.Design Experimental study.Participants β-chemokine,BV-2 cells of mice,661w cells of mice.Methods Activation of BV-2 cells were studied when β-chemokines (RANTES,MIP-1αandMIP-13) were added.The cell death of 661w cells was observed when the supernatant of the activated BV-2 cells was added into the 661w cells.The 661w cell apoptosis was also studied when the β-chemokines were directly added.Met-RANTES (the inhibitor of 3-chemokine) was added before hand and above markers were studied.Main Outcome Measures Calcium influx,ROS,NO,TUNEL positive cells.Results The calcium influxesas well as release of ROS,NO by the BV-2 cells was increased (P<0.01) after adding β-chemokine.The 661w cell death was elevated by 30% after adding the supernatant of activated microglia.Above markers can be inhibited by the β-chenokine inhibitors (ROS P<0.01,NO P=0.0187).There was no change when adding β-chemokine into 661w cells directly.Conclusions β-chemokines can activate microglia,which induce photoreceptor cell death by release of ROS or NO.Photoreceptor degeneration of RP mice may be protected by inhibition of β-chemokine inhibitors.
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