【摘 要】
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目的:研究低氧对人肝癌细胞株HepG2细胞表达缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)及缺氧特异性微小RNA-210(microRNA-210,miR-210)的影响,探讨肿瘤细
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目的:研究低氧对人肝癌细胞株HepG2细胞表达缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)及缺氧特异性微小RNA-210(microRNA-210,miR-210)的影响,探讨肿瘤细胞在低氧环境下miR-210表达的变化情况。方法:HepG2细胞经体外常规培养后,用体积分数为1%的氧气分别培养HepG2细胞6、12、18和24h。应用实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcriptionPCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测细胞中HIF-1αmRNA和蛋白的表达变化,同时用茎环RT-PCR检测miR-210的表达变化,分析HIF-1α与miR-210的表达关系。染色质免疫共沉淀PCR(chromatin immunoprecitation PCR,ChIP-PCR)分析HIF-1α与miR-210启动子结合的可能性。结果:低氧培养6~12h,HIF-1αmRNA的表达量存在明显改变(P<0.05),而其蛋白的表达量从低氧培养开始直至24h均有明显变化(P<0.005);与此同时,miR-210的表达量在低氧培养6~18h时出现明显改变(P<0.01),且与HIF-1α蛋白表达存在明显的线性相关(R=0.795,P=0.037)。进一步的ChIP-PCR实验表明,HIF-1α在HepG2细胞内可与miR-210启动子区近转录区的低氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,从而发挥转录调控作用。结论:适度的低氧环境可能影响miR-210表达,其机制可能是通过HIF-1α结合其启动子来调节实现的。
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