K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

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利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶(PEL),获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体(ep8),ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性,利用重叠延伸PCR法,以ep8基因为模板,将第202位赖氨酸突变为丙氨酸(K202A),构建表达质粒pA0815.ep8.K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8.K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15%SDS-PAGE结果分析表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa
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