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摘要：目的： 探讨M2型抗线粒体抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的临床价值。 方法 回顾分析48例原发性胆汁性肝硬化（观察组）和40例其他原因导致肝硬化（对照组）患者血清M2型抗线粒体抗体、碱性磷酸酶（ALP）及氨酰转肽酶（GGT）检测结果。 结果 观察组患者血清M2型抗线粒体抗体检测阳性率91.67%；高于对照组的2.50%，差异有统计学意义（P<0.05）。血清M2型抗线粒体抗体阳性与阴性患者ALP及GGT水平相似，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 原发性胆汁性肝硬化患者血清M2型抗线粒体抗体阳性率较高，有助于早期诊断，为临床治疗提供参考依据。
关键词： 原发性胆汁性肝硬化；抗线粒体抗体； M2型
【中图分类号】R575.22 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）04-0065-01
近年来，随着检验医学的飞速发展，敏感检测方法相继开展，无症状、无黄疸的原发性胆汁肝硬化早期诊断逐渐增多。文献报道[1]，抗线粒体抗体与原发性胆汁性肝硬化有关，高滴度的抗线粒体抗体是其主要的血清学指标，其中M2亚型具有特异性。本研究回顾性分析68例原发性胆汁性肝硬化患者M2型抗线粒体抗体检测结果，报道如下。
1.资料与方法
1.1诊断标准 参照2009年美国肝病学会原发性胆汁性肝硬化指南中的诊断标准[2]：①存在胆汁淤积症的生化学证据，主要是碱性磷酸酶（ALP）升高；②血清抗线粒体抗体阳性；③非化脓性破坏性胆管炎及小叶间胆管破坏的组织学证据。如果符合上述三个标准中的两项即可诊断原发性胆汁性肝硬化。
1.2临床资料 2010年1月～2014年1月，选取在我院诊治的原发性胆汁性肝硬化患者48例（观察组），其中男19例、女29例，年龄23～57岁，平均（45.57±8.19）岁。主要临床表现：黄疸31例（64.58%）、疲乏26例（54.17%）、纳差24例（50.00%）和皮肤瘙痒 19例（39.58%）。选择同期在我院治疗的其他原因导致的肝硬化（梗阻性黄疸及恶性肿瘤者除外）患者40例（对照组），其中乙肝肝硬化27例、酒精性肝硬化13例，男22例、女18例，年龄29～59岁，平均（46.90±8.43）岁。主要临床表现：黄疸24例（60.00%）、疲乏20例（50.00%）、纳差17例（42.50%）和皮肤瘙痒 12例（30.00%）。两组患者年龄、性别及临床表现相似，差异统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.3检测指标及方法
1.3.1样本收集 患者均于空腹清晨8：00时抽取静脉血5 ml置入EDTA抗凝管中，常温下3000 r/min离心10 min，分离血清保存于-70℃冰箱集中待测。
1.3.1生化指标 ALP及氨酰转肽酶（GGT）采用全自动生化分析仪（日立7600—020）检测。
1.3.2M2型抗线粒体抗体 M2型抗线粒体抗体酶免疫试剂盒由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供。操作步骤：①加样。用100μL样品稀释液按1：200比例稀释血清，将不同浓度的M2型抗线粒体抗体标准品及血清依次加入到已包被M2抗原的微孔中；在微振荡器上进行振荡混匀，室温（18℃～24℃）孵育30 min，应用自动洗板机洗板3次，拍干。②酶结合物反应。将50μL已稀释的碱性磷酸酶标记的抗人IgG加入相应微孔中，室温条件下再次温育30 min及洗涤、拍干。③显色：各微孔依次加入50 μL底物液室温下反应10 min，洗板、风干。④结果判断：M2抗原包被区出现深蓝或紫色条带为阳性，无颜色为阴性。
1.4统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析处理，计数资料比较采用卡方检验，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组患者血清M2型抗线粒体抗体检测结果比较 观察组患者血清M2型抗线粒体抗体检测阳性44例，阳性率91.67%，阴性4例，阴性率8.33%；对照组患者血清M2型抗线粒体抗体检测阳性1例，阳性率2.50%，阴性39例，阴性率97.5%；差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2血清M2型抗线粒体抗体阳性与阴性患者生化指标比较 M2阳性组ALP为 256.91±34.75 U/L，GGT 274.33±38.41 U/L， M2阴性组ALP为 242.65±33.93 U/L， GGT 268.97±35.80 U/L. 血清M2型抗线粒体抗体阳性与阴性患者ALP及GGT水平相似，差异无统计学意义（P>0.05）
3.讨论
原发性胆汁性肝硬化发病与自身免疫、病原微生物感染、接触化学物品、遗传和家庭因素有关，临床主要表现为皮肤瘙痒、进行性黄疸、黄色瘤、肝脾肿大和后期出现门脉高压症，好发于中老年女性[3]。本研究显示男：女为0.66：1，平均年龄（45.57±8.19）岁。原发性胆汁性肝硬化目前尚无有效的治疗方法，所以早期诊断、及时治疗对于改善患者的预后至关重要。抗线粒体抗体共有9各亚型，与原发性胆汁性肝硬化相关的有M2、M4、M8及M9亚型。M2是线粒体内膜抗体，可与多个抗原发生反应，最主要是与丙酮酸脱氧酶E2亚基，其次则是2-氧戊二酸脱氢酶复合物与2-氧戊二酸脱氢酶复合体的E2亚基。中M2诊断原发性胆汁性肝硬化的特异性抗体，主要原因：①灵敏度及特异度均达到95%以上[4]。②在疾病早期已经出现，甚至在无症状的体检者中可出现，多年后大多数发展为原发性胆汁性肝硬化患者；③动物实验证实M2抗原可诱导建立小鼠原发性胆汁性肝硬化模型，其生化与病理特征和人类相似， 进一步证实了M2在原发性胆汁性肝硬化发病中的重要作用[5]。本研究显示，48例原发性胆汁性肝硬化患者血清M2型抗线粒体抗体阳性率高达91.67%，进一步证实了上述结论。国内文献报道[6]，5011名健康体检者，8例检出血清M2型抗线粒体抗体阳性，其中5例符合美国肝病学会推荐的原发性胆汁性肝硬化诊断标准，提示无症状者在我国也不少见，也说明怀疑该病者应早做M2亚型筛查。许峰[7]报道采用ELISA法检测原发性胆汁性肝硬化患者血清M2型抗线粒体抗体水平，以25 RU/mL（95%上限为25 RU/mL）为临界值，其灵敏度为95.2%，特异度为97.4%，诊断符合率达95.6%，阴性预测值98.7%，阳性预测值 90.9%，对其诊断原发性胆汁性肝硬化进一步量化。本研究还发现，M2型抗线粒体抗体无论是阴性还是阳性患者，其肝脏均具有以下病理改变：①胆管改变明显，以小胆管最具特征性，胆管周围见炎性细胞浸润；②汇管区细胞浸润现象明显，甚至形成淋巴滤泡；③肝细胞改变相对较轻，缺乏特异性。所以，对M2型抗线粒体抗体阴性者，病理学检查十分重要。ALP及GGT升高是原发性胆汁性肝硬化患者肝功能损害的特征性改变。本研究48例患者肝功能ALP及GGT均为阳性，较正常值高4～6倍。并且M2型抗线粒体抗体阴性及阳性患者，ALP及GGT水平无差异。
综上所述，原发性胆汁性肝硬化早期临床症状轻微且无特异性，极易误诊为病毒性肝炎或肝炎性肝硬化，临床医师有必要加强对原发性胆汁性肝硬化及M2型抗线粒体抗体的认识，将有助于患者获得早期诊断和有效治疗，对患者预后具有十分重要的意义。
参考文献：
[1]陈乃玲，杨新玲，刘晓彬，等.血清抗线粒体抗体亚型对原发性胆汁性肝硬化诊疗的临床评估[J].中华临床医师杂志（电子版），2008，2（10）：1114-1122.
[2]American Association for Study of Liver Diseases.AASLD practice guidelines：primary biliary cirrhosis. Hepatology[J].2009，50（1）：291-308.
[3]李金祥，杨晋辉.原发性胆汁性肝硬化AMA-M2阴性患者的临床及病理特点[J].世界华人消化杂志，2009，17（16）：1676-1679.
[4]Jones DE. Pathogenesis of primary biliary cirrhosis[J].Gut，2007，56 （11）：1615-1624.
[5]姜小华，仲人前，方晓云，等.抗线粒体抗体M2抗原诱导小鼠原发性胆汁性肝硬化模型的建立[J].中华肝脏病杂志，2006，14（3）：202-204.
[6]姜小华，仲人前，方晓云，等.原发性胆汁性肝硬化特异性AMA-M2抗体在5011名体检者中的筛查分析[J].中华检验医学杂志，2003，26（8）：553-555.
[7]许峰.血清抗线粒体抗体M2亚型检测在原发性胆汁性肝硬化临床诊断中的价值[J].诊断学理论与实践， 2013，12（5）：556-558.
关键词： 原发性胆汁性肝硬化；抗线粒体抗体； M2型
【中图分类号】R575.22 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）04-0065-01
近年来，随着检验医学的飞速发展，敏感检测方法相继开展，无症状、无黄疸的原发性胆汁肝硬化早期诊断逐渐增多。文献报道[1]，抗线粒体抗体与原发性胆汁性肝硬化有关，高滴度的抗线粒体抗体是其主要的血清学指标，其中M2亚型具有特异性。本研究回顾性分析68例原发性胆汁性肝硬化患者M2型抗线粒体抗体检测结果，报道如下。
1.资料与方法
1.1诊断标准 参照2009年美国肝病学会原发性胆汁性肝硬化指南中的诊断标准[2]：①存在胆汁淤积症的生化学证据，主要是碱性磷酸酶（ALP）升高；②血清抗线粒体抗体阳性；③非化脓性破坏性胆管炎及小叶间胆管破坏的组织学证据。如果符合上述三个标准中的两项即可诊断原发性胆汁性肝硬化。
1.2临床资料 2010年1月～2014年1月，选取在我院诊治的原发性胆汁性肝硬化患者48例（观察组），其中男19例、女29例，年龄23～57岁，平均（45.57±8.19）岁。主要临床表现：黄疸31例（64.58%）、疲乏26例（54.17%）、纳差24例（50.00%）和皮肤瘙痒 19例（39.58%）。选择同期在我院治疗的其他原因导致的肝硬化（梗阻性黄疸及恶性肿瘤者除外）患者40例（对照组），其中乙肝肝硬化27例、酒精性肝硬化13例，男22例、女18例，年龄29～59岁，平均（46.90±8.43）岁。主要临床表现：黄疸24例（60.00%）、疲乏20例（50.00%）、纳差17例（42.50%）和皮肤瘙痒 12例（30.00%）。两组患者年龄、性别及临床表现相似，差异统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.3检测指标及方法
1.3.1样本收集 患者均于空腹清晨8：00时抽取静脉血5 ml置入EDTA抗凝管中，常温下3000 r/min离心10 min，分离血清保存于-70℃冰箱集中待测。
1.3.1生化指标 ALP及氨酰转肽酶（GGT）采用全自动生化分析仪（日立7600—020）检测。
1.3.2M2型抗线粒体抗体 M2型抗线粒体抗体酶免疫试剂盒由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供。操作步骤：①加样。用100μL样品稀释液按1：200比例稀释血清，将不同浓度的M2型抗线粒体抗体标准品及血清依次加入到已包被M2抗原的微孔中；在微振荡器上进行振荡混匀，室温（18℃～24℃）孵育30 min，应用自动洗板机洗板3次，拍干。②酶结合物反应。将50μL已稀释的碱性磷酸酶标记的抗人IgG加入相应微孔中，室温条件下再次温育30 min及洗涤、拍干。③显色：各微孔依次加入50 μL底物液室温下反应10 min，洗板、风干。④结果判断：M2抗原包被区出现深蓝或紫色条带为阳性，无颜色为阴性。
1.4统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析处理，计数资料比较采用卡方检验，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组患者血清M2型抗线粒体抗体检测结果比较 观察组患者血清M2型抗线粒体抗体检测阳性44例，阳性率91.67%，阴性4例，阴性率8.33%；对照组患者血清M2型抗线粒体抗体检测阳性1例，阳性率2.50%，阴性39例，阴性率97.5%；差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2血清M2型抗线粒体抗体阳性与阴性患者生化指标比较 M2阳性组ALP为 256.91±34.75 U/L，GGT 274.33±38.41 U/L， M2阴性组ALP为 242.65±33.93 U/L， GGT 268.97±35.80 U/L. 血清M2型抗线粒体抗体阳性与阴性患者ALP及GGT水平相似，差异无统计学意义（P>0.05）
3.讨论
原发性胆汁性肝硬化发病与自身免疫、病原微生物感染、接触化学物品、遗传和家庭因素有关，临床主要表现为皮肤瘙痒、进行性黄疸、黄色瘤、肝脾肿大和后期出现门脉高压症，好发于中老年女性[3]。本研究显示男：女为0.66：1，平均年龄（45.57±8.19）岁。原发性胆汁性肝硬化目前尚无有效的治疗方法，所以早期诊断、及时治疗对于改善患者的预后至关重要。抗线粒体抗体共有9各亚型，与原发性胆汁性肝硬化相关的有M2、M4、M8及M9亚型。M2是线粒体内膜抗体，可与多个抗原发生反应，最主要是与丙酮酸脱氧酶E2亚基，其次则是2-氧戊二酸脱氢酶复合物与2-氧戊二酸脱氢酶复合体的E2亚基。中M2诊断原发性胆汁性肝硬化的特异性抗体，主要原因：①灵敏度及特异度均达到95%以上[4]。②在疾病早期已经出现，甚至在无症状的体检者中可出现，多年后大多数发展为原发性胆汁性肝硬化患者；③动物实验证实M2抗原可诱导建立小鼠原发性胆汁性肝硬化模型，其生化与病理特征和人类相似， 进一步证实了M2在原发性胆汁性肝硬化发病中的重要作用[5]。本研究显示，48例原发性胆汁性肝硬化患者血清M2型抗线粒体抗体阳性率高达91.67%，进一步证实了上述结论。国内文献报道[6]，5011名健康体检者，8例检出血清M2型抗线粒体抗体阳性，其中5例符合美国肝病学会推荐的原发性胆汁性肝硬化诊断标准，提示无症状者在我国也不少见，也说明怀疑该病者应早做M2亚型筛查。许峰[7]报道采用ELISA法检测原发性胆汁性肝硬化患者血清M2型抗线粒体抗体水平，以25 RU/mL（95%上限为25 RU/mL）为临界值，其灵敏度为95.2%，特异度为97.4%，诊断符合率达95.6%，阴性预测值98.7%，阳性预测值 90.9%，对其诊断原发性胆汁性肝硬化进一步量化。本研究还发现，M2型抗线粒体抗体无论是阴性还是阳性患者，其肝脏均具有以下病理改变：①胆管改变明显，以小胆管最具特征性，胆管周围见炎性细胞浸润；②汇管区细胞浸润现象明显，甚至形成淋巴滤泡；③肝细胞改变相对较轻，缺乏特异性。所以，对M2型抗线粒体抗体阴性者，病理学检查十分重要。ALP及GGT升高是原发性胆汁性肝硬化患者肝功能损害的特征性改变。本研究48例患者肝功能ALP及GGT均为阳性，较正常值高4～6倍。并且M2型抗线粒体抗体阴性及阳性患者，ALP及GGT水平无差异。
综上所述，原发性胆汁性肝硬化早期临床症状轻微且无特异性，极易误诊为病毒性肝炎或肝炎性肝硬化，临床医师有必要加强对原发性胆汁性肝硬化及M2型抗线粒体抗体的认识，将有助于患者获得早期诊断和有效治疗，对患者预后具有十分重要的意义。
参考文献：
[1]陈乃玲，杨新玲，刘晓彬，等.血清抗线粒体抗体亚型对原发性胆汁性肝硬化诊疗的临床评估[J].中华临床医师杂志（电子版），2008，2（10）：1114-1122.
[2]American Association for Study of Liver Diseases.AASLD practice guidelines：primary biliary cirrhosis. Hepatology[J].2009，50（1）：291-308.
[3]李金祥，杨晋辉.原发性胆汁性肝硬化AMA-M2阴性患者的临床及病理特点[J].世界华人消化杂志，2009，17（16）：1676-1679.
[4]Jones DE. Pathogenesis of primary biliary cirrhosis[J].Gut，2007，56 （11）：1615-1624.
[5]姜小华，仲人前，方晓云，等.抗线粒体抗体M2抗原诱导小鼠原发性胆汁性肝硬化模型的建立[J].中华肝脏病杂志，2006，14（3）：202-204.
[6]姜小华，仲人前，方晓云，等.原发性胆汁性肝硬化特异性AMA-M2抗体在5011名体检者中的筛查分析[J].中华检验医学杂志，2003，26（8）：553-555.
[7]许峰.血清抗线粒体抗体M2亚型检测在原发性胆汁性肝硬化临床诊断中的价值[J].诊断学理论与实践， 2013，12（5）：556-558.