【摘 要】
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目的 构建免疫抑制受体igsf9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响.方法 将Cas 9 mRNA和igsf9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定.将2×106个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf9+/+和C57BL/6-igsf9-/-小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm3时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤
【机 构】
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滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室,山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队 山东 烟台 264003
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目的 构建免疫抑制受体igsf9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响.方法 将Cas 9 mRNA和igsf9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定.将2×106个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf9+/+和C57BL/6-igsf9-/-小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm3时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平.结果 igsf9基因4-9外显子区域出现了2892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异.与C57BL/6-igsf9+/+小鼠相比,C57BL/6-igsf9-/-小鼠显著抑制肿瘤细胞的生长,肿瘤组织浸润,CD3+T细胞、CD3+/CD4+T细胞、CD3+/CD8+T细胞水平显著升高,B细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数量未见明显变化.结论 C57BL/6小鼠敲除igsf9基因表达能够促进肿瘤组织中T细胞的浸润或激活,从而抑制肿瘤生长.
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