墨西哥红豆杉愈伤组织的诱导和器官发生

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植物名称墨西哥红豆杉(Taxus globo-sa)。2 材料类别墨西哥州 Pachuca县Hidalgo山森林中自然生长的墨西哥红豆杉成年树当年生成熟枝(9月份取样)。3 培养条件愈伤组织诱导培养基是SH,B5和NN69基本培养基添加NAA 2.0 mg·L-1、BA 0.1 mg·L-1、3%蔗糖和0.6%琼脂(pH 5.6)。此外,变换SH愈伤组织诱导培养基中的BA浓度为0.03、0.2、0.5和1.0mg·L-1。愈伤组织每6周继代1次。继代培养基是SH基本培养基,添加NAA 2.0mg·L-1和BA 0.05 mg·L-1,其它成分同上。培养温度为20~25℃,暗中培养。4 生长与分化情况4.1 不同培养基对愈伤组织诱导和生长的影响墨西哥红豆杉茎段接种后2~4周,诱导出白色疏松的愈伤组织;随着愈伤组织逐渐生长,愈伤组织颜色转变为棕色或褐色。接种后6周,NN69培养基的出愈率最高,达67.5%;其次为B5培养基(32.6%)和SH培养基(31.6%)。愈伤组织继续生长2~4周后,所有茎段愈伤组织生长缓慢直至停止,愈伤组织颜色变为棕褐或黑褐色。经过4~8周的停滞生长后,大部分茎段愈伤组织重新恢复生长。此后,愈伤组织每6周继代1次。在继代培养中,SH培养基上的愈伤组织生长最快,其次为B5和NN69培养基。rn4.2 BA浓度对愈伤组织诱导的影响在SH培养基上添加不同浓度BA影响茎段愈伤组织的诱导。BA 0.1 mg·L-1的愈伤组织诱导率最高,达37.1%;BA浓度低于或高于0.1时,愈伤组织诱导率都降低,如0.03、0.2、0.5和1.0 BA的愈伤组织诱导率分别是25.0%、13.6%、16.7%和26.9%。BA浓度在0.2~1.0范围内,随着浓度升高,愈伤组织诱导率出现逐渐增加的趋势。4.3 不定根的分化和生长当愈伤组织在SH继代培养基上继代培养3次后,有5个愈伤组织系分化出白色幼嫩的不定根,其生长状态不一样。愈伤组织系10-2生长最快,平均每周每g愈伤组织增加0.40 g,仅有1块愈伤组织分化1条生长细弱的不定根。虽然愈伤组织系10-1和10-3平均每周每g愈伤组织增加0.24 g和0.25 g,各有1块愈伤组织分化不定根,但是每块愈伤组织分化3~5条生长旺盛的不定根。愈伤组织系10-4、10-5和12-1的生长与10-1和10-3相似,平均每周每g愈伤组织分别增加0.19、0.23和0.27 g,不同的是前者有较多的愈伤组织分化不定根(分别为5、4和7块愈伤组织),并且每块愈伤组织仅分化1条不定根。说明墨西哥红豆杉茎段愈伤组织系的生长量越大,其不定根分化的能力越小;愈伤组织系具有较多愈伤组织分化不定根,每块愈伤组织分化的不定根数量少和生长较弱;只有愈伤组织系生长量适中且较少愈伤组织分化的不定根生长旺盛。愈伤组织发生不定根的能力在以后2~3次继代过程中消失,没有愈伤组织系继续再生不定根。我们用不同培养方法诱导墨西哥红豆杉愈伤组织分化不定芽,至今尚未成功。5 意义与进展墨西哥红豆杉为红豆杉科rn红豆杉属植物,其紫杉醇含量较高。研究墨西哥红豆杉愈伤组织的诱导对于进一步进行细胞悬浮培养和离体生产紫杉醇会有所帮助。此外,墨西哥红豆杉愈伤组织直接在继代培养过程中分化不定根,表明红豆杉当年生成熟枝条茎段愈伤组织具有一定的再生能力。本文结果对研究诱导红豆杉茎段愈伤组织不定芽的再生可能有一定的参考意义。迄今尚未见到墨西哥红豆杉组织培养的报道。
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