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目的
探讨核受体协同抑制因子(NCOR)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应中的作用及其调控机制。
方法1 μg/ml的LPS分别处理小鼠巨噬细胞RAW264.7 24 h和48 h，应用Western blot和Real time-PCR检测NCOR的表达水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6) mRNA水平，荧光素酶报告基因检测核因子-κB (NF-κB)的启动子活性。LPS处理细胞48 h后，应用MSP检测NCOR启动子是否发生甲基化以及Western blot检测DNMT3b的表达变化。Real time-PCR检测5′-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA的表达水平；转染DNMT3b siRNA后，分别应用Western blot和Real time-PCR检测DNMT3b的表达水平，以及DNMT3b siRNA和LPS联合作用下NCOR、TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性。
结果LPS干预细胞24、48 h后，NCOR蛋白和mRNA表达显著下调(P<0.05)，而TNF-α、IL-6 mRNA表达水平、DNMT3b蛋白的表达水平以及NF-κB的启动子活性显著上升(P<0.05)。MSP检测说明LPS可介导NCOR的启动子甲基化。用5′-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA水平较LPS组有显著上升(P<0.05)。采用DNMT3b siRNA可显著下调DNMT3b蛋白和mRNA水平，并可部分逆转LPS介导的抑制NCOR表达的效应，抑制TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性(P<0.05)。
结论NCOR启动子的甲基化是LPS介导巨噬细胞炎症反应发生、发展的关键步骤，其可作为治疗ALI/ARDS的潜在靶点。