【摘 要】
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体外合成DNA伴随的随机突变是制约基因定点突变效率的重要因素。以克隆周期蛋白E(cyclin E)及其截短基因的激酶活性缺失突变体为例,对传统重叠延伸PCR(overlap extension PCR
【基金项目】
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湖北文理学院学科开放基金项目(XK2020058),湖北文理学院教师科研能力培育基金项目(2020kypyfy019)
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体外合成DNA伴随的随机突变是制约基因定点突变效率的重要因素。以克隆周期蛋白E(cyclin E)及其截短基因的激酶活性缺失突变体为例,对传统重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)作适当改进,提出一种系列相关基因定点突变的优化方案。前期研究中已克隆了cyclin E基因及其2个截短基因T1、T2,并通过Eco RⅠ/SalⅠ双酶切插入pEGFP_C2载体。限制性酶切分析发现cyclin E基因序列中含有1个AgeⅠ位点将其分为F1、F2两段,目标突变位点KD位于F2段。
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