【摘 要】
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采用N-羟基琥珀酰亚胺活性脂(NHS)法将罗丹明B(Rhodamine B,RB)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联形成免疫原和检测原,经紫外分光光度计扫描鉴定初步判断偶联成功
【机 构】
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扬州大学兽医学院; 常州市第一人民医院;
【基金项目】
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江苏高校优势学科建设工程;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏省高校重点实验室开放课题资助
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采用N-羟基琥珀酰亚胺活性脂(NHS)法将罗丹明B(Rhodamine B,RB)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联形成免疫原和检测原,经紫外分光光度计扫描鉴定初步判断偶联成功。以人工合成免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了3株稳定分泌针对RB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D1、4C3和7F11,将7F11注入BALB/c小鼠腹腔产生腹水,用所得到的腹水建立了间接竞争ELISA(ic ELISA)标准曲线。对ic ELISA的工作条件进行了优化,方阵试验确定了包被抗原的工作浓度为1∶2 000,腹水抗体的工作浓度为1∶64 000。利用RB作药物抑制标准曲线,其线性方程为y=0.2848x-0.2847(R2=0.9924),线性范围为1~1 000 ng/m L,最低检测浓度为1 ng/m L。交叉试验表明,该单抗与RB的抑制率为100%,与罗丹明6G、罗丹明123、苯酚红、副品红、中性红、曙红Y、橙黄Ⅱ、甲基橙、结晶紫均无交叉反应。
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