人类扭转蛋白A的基因克隆、表达与蛋白质纯化(Ⅰ)——DYT1基因克隆与原核表达

来源 :烟台大学学报:自然科学与工程版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanggl981025
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通过基因工程方法,用大肠杆菌原核表达系统表达人扭转蛋白A.从该蛋白编码序列中设计引物,以人肝cDNA文库作模板扩增到编码该蛋白的基因片段.将所得片段与pMDl8-T载体连接,转化到JM109大肠杆菌中,从转化平板上挑出菌落,用碱裂解法提取质粒,通过PCR和酶切分析,筛选到阳性克隆,测序结果与文献报道结果一致.提取质粒,用BamHI和XhoI酶切,回收目的片段,分别克隆到原核表达载体pET28a(4-)和pGEX-6P-1中,转化JM109受体菌,从JM109受体菌中提出质粒,再转化到BL21(DE3)菌中
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