慢病毒介导的热休克蛋白70基因对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤细胞钙稳态的影响及机制研究

来源 :中华危重病急救医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:skybey
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目的:探讨慢病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)基因表达对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤(PC12)细胞钙稳态的影响及机制。方法取对数生长期的PC12细胞,分为重组慢病毒感染组(感染含HSP70及荧光蛋白基因的慢病毒)、慢病毒对照组(感染含荧光蛋白而不含HSP70基因的慢病毒)及未感染组3组。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞HSP70 mRNA表达,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HSP70蛋白表达。PC12细胞缺血/缺氧处理4 h后,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定细胞上清液LDH水平,流式细胞仪检测细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度,ATP酶试剂盒测定Na+-K+-ATP酶、 Ca2+-Mg2+-ATP酶、总ATP酶活性。结果重组慢病毒感染组PC12细胞HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达呈阳性。经缺血/缺氧处理后,与慢病毒对照组和未感染组比较,重组慢病毒感染组细胞活性明显增强(A值:0.575±0.020比0.395±0.014、0.363±0.045,t1=17.996,t2=10.600,均P<0.001),细胞上清液中LDH水平明显降低(U/L:743.46±23.68比935.43±34.77、962.89±26.68,t1=11.179,t2=15.044,均P<0.001),[Ca2+]i浓度显著降低〔相对荧光强度:(31.60±2.43)%比(41.48±3.33)%、(40.40±3.05)%, t1=5.853,t2=5.502,均P<0.001〕,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、总ATP酶活性显著升高〔Na+-K+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1):8.608±0.307比6.728±0.173、6.450±0.091,t1=9.237、P1=0.001,t2=11.675、P2<0.001;Ca2+-Mg2+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1):10.523±0.036比7.910±0.209、8.064±0.195,t1=9.718、P1=0.001,t2=11.535、P2<0.001;总ATP酶(μmol·mg-1·h-1):17.041±0.324比14.150±0.182、13.983±0.085,t1=16.113,t2=17.602,均P<0.001〕。慢病毒对照组与未感染组各指标差异均无统计学意义。结论 HSP70能维持缺血/缺氧PC12细胞钙稳态,可能是其抗凋亡的重要机制之一。
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