目的 探讨缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)沉默对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及其机制.方法 常规培养SGC7901细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot法检测低氧组(90％氮气+5％氢气+5％二氧化碳)和正常氧条件下HIF-2α、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达；合成针对HIF-2α的小干扰RNA(HIF-2α-siRNA)；Western blot检测HIF-2α-siRNA的转染效果；细胞计数试剂盒(CCK)法检测HIF-2α-siRNA转染后的细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率；FQ-PCR和Western blot检测转染前后bcl-2、bax、Caspase-3的表达.结果 低氧条件下,HIF-2α(2.94±0.31、0.61±0.08)、bcl-2 (2.0l±0.29、1.05±0.09) mRNA和蛋白表达与正常氧条件下HIF-2α(1.06±0.15、0.23±0.04)、bcl-2(1.08±0.16、0.34±0.05)比较明显升高,bax (0.54±0.06、0.48 ±0.05)、Caspase-3(0.45±0.05、0.58 ±0.07)mRNA和蛋白表达与正常氧条件bax (0.97 ±0.13、0.74±0.12)、Caspase-3 (0.96±0.12、0.89 ±0.14)比较则明显降低(P＜0.05)；HIF-2α-siRNA转染后与转染前比较能有效沉默HIF-2α；HIF-2α-siRNA转染后[(0.47±0.05)％]与转染前[(0.89±0.12)％]比较能抑制增殖水平,与转染前[(8.15±0.97)％]比较,转染后[(20.16±3.09)％]凋亡率升高(P＜0.05)；与转染前(0.96 ±0.09、1.37 ±0.21、1.13±0.19、0.82±0.16、0.97 ±0.13、0.69±0.11)比较,转染后可降低bcl-2 mRNA和蛋白表达(0.43±0.06、0.78±0.12),升高bax(2.91 ±0.28、1.51 ±0.28)、Caspase-3 mRNA和蛋白表达(2.42 ±0.34、1.34 ±0.21) (P＜0.05).结论 低氧下,HIF-2α-siRNA可通过降低bcl-2表达、升高bax、CasDase-3表达而诱导SGC7901细胞凋亡。
siRNA沉默缺氧诱导因子-2α对胃癌细胞SGC7901凋亡的影响和机制
【摘 要】
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目的 探讨缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)沉默对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及其机制.方法 常规培养SGC7901细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot法检测低氧组(90％氮气+5％氢气+5％二氧化碳)和正常氧条件下HIF-2α、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达；
【机 构】
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063000唐山市工人医院肿瘤外科,063000唐山市工人医院肿瘤外科,063000唐山市工人医院肿瘤外科,063000唐山市工人医院肿瘤外科,063000唐山市工人医院肿瘤外科,063000唐山市工
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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