【摘 要】
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抽提中华眼镜蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR扩增cobrotoxin cDNA,克隆并测序。该cDNA编码83个氨基酸,包括21个氨基酸的信号肽和62个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白的氨基酸序列和通
【机 构】
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中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心上海
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抽提中华眼镜蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR扩增cobrotoxin cDNA,克隆并测序。该cDNA编码83个氨基酸,包括21个氨基酸的信号肽和62个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白的氨基酸序列和通过蛋白测序从台湾眼镜蛇鉴定的Cobrotoxin完全一致。PCR扩增编码Cobrotoxin的DNA,并亚克隆到表达载体pMAL-P2。此外,通过合成寡核苷酸片段,拼接成完整的CM-11基因,并将其克隆至pMAL-P2。经IPTG诱导,两种神经毒素基因在大肠杆菌中都得到高效的可溶性融合表达。表达产物通过SDS-PAGE和蛋白印迹杂交加以鉴定。表达的融合蛋白经过Sepharose 6B-amylose亲和色谱和DEAE-Sepharose FF离子交换色谱得到有效纯化。经Xa因子酶切后得到的两种重组神经毒素都具有小白鼠体内毒性。
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