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目的
探讨放疗抵抗的宫颈癌细胞特性,揭示宫颈癌复发和转移的机制。
方法用多次分割照射获得耐辐射的宫颈鳞状细胞癌Siha细胞,利用流式细胞仪从宫颈鳞癌的亲代细胞中分选获得CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞。将耐辐射的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞设为实验组,亲代宫颈鳞癌细胞设为对照组,分别进行克隆形成实验和肿瘤移植瘤实验,评估实验组细胞是否具备肿瘤干细胞特性。通过Transwell侵袭实验研究实验组及对照组细胞侵袭和转移能力的差异。利用RT-PCR和Western blot检测实验组及对照组细胞OCT-4、Survivin、ABCG2和bcl-2 mRNA的表达,以及与肿瘤转移相关的E-cadherin和vimentin蛋白表达。
结果辐射抵抗的宫颈鳞癌细胞和CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞较亲代宫颈癌细胞高表达抗凋亡蛋白Bcl-2(t=205.26、198.17,P<0.05)和凋亡抑制蛋白survivin(t=896.62、765.34,P<0.05),并表达肿瘤干细胞相关标志物OCT-4和ABCG2(t=92.13、81.26、220.45、216.32,P<0.05)。两组细胞均具有较强的致瘤能力以及侵袭和转移能力,且表现出E-cadherin下调和vimentin蛋白上调的EMT相关的分子表型变化。
结论放射抵抗的宫颈鳞癌细胞与CD44+/CD24+宫颈鳞癌细胞表现出相同的肿瘤干细胞特性,经历了上皮间质转化过程,放射可以富集宫颈癌干细胞。