【摘 要】
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目的观察下调CtBP2对人前列腺癌C4-2细胞体外增殖及体内成瘤的影响并讨论其机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测前列腺癌组织和癌旁组织中Ct-BP2 m RNA表达量;将靶向CtBP2基因短发卡RNA(sh RNA)质粒及阴性对照(NC)质粒分别转入C4-2细胞,FQ-PCR和Western blot法分别检测CtBP2 m RNA及蛋白的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-
【机 构】
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300211天津医科大学第二医院泌尿外科天津市泌尿外科研究所,
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目的观察下调CtBP2对人前列腺癌C4-2细胞体外增殖及体内成瘤的影响并讨论其机制。
方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测前列腺癌组织和癌旁组织中Ct-BP2 m RNA表达量;将靶向CtBP2基因短发卡RNA(sh RNA)质粒及阴性对照(NC)质粒分别转入C4-2细胞,FQ-PCR和Western blot法分别检测CtBP2 m RNA及蛋白的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞仪分别检测下调CtBP2表达对C4-2细胞体外增殖能力和凋亡的影响;裸鼠皮下移植瘤实验观察下调CtBP2对成瘤的影响;通过Western blot法检测下调CtBP2对c-myc和HSPC111蛋白表达的影响。
结果CtBP2 m RNA在前列腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(4. 08±1. 25比1. 0±0. 46)(P< 0. 05);与NC组细胞比较,CtBP2-sh RNA组细胞CtBP2的m RNA(0. 21±0. 03比0. 97±0. 09)和蛋白(0. 45±0. 02比1. 02±0. 07)表达量均显著降低(P< 0. 05);CCK-8检测结果显示,在24、48、72 h CtBP2-sh RNA组细胞450nm处吸光度值分别为0. 45 ±0. 05,1. 37±0. 09和1. 64±0. 07,而NC组细胞为0. 78±0. 08,2. 35±0. 18和2. 99±0. 28,下调CtBP2后细胞增殖水平分别降至NC组细胞的(60. 1±13. 3)%、(59. 4±6. 3)%和(56. 0±6. 6)%;通过流式细胞检测发现下调CtBP2可显著促进C4-2细胞的凋亡,凋亡率为(32. 57±1. 98)%(P< 0. 05),而空白对照组和NC组细胞凋亡率分别为(15. 63±0. 38)%和(15. 87±0. 99)%;体内实验显示下调CtBP2表达显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长;通过Western blot发现下调CtBP2可显著降低C4-2细胞中c-myc(0. 55±0. 03比0. 96±0. 02)及其下游靶蛋白HSPC111(0. 56±0. 02比1. 04 ±0. 10)的表达量(P< 0. 05)。
结论CtBP2可通过c-myc-HSPC111通路参与调控前列腺癌C4-2细胞的增殖能力及体内成瘤能力。
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