【摘 要】
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目的 探讨核因子(NF)-κB圈套寡核苷酸(ODN)对NF-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响. 方法利用电泳迁移率改变实验(EMSA),测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF-κB的DNA结合能力的竞争抑制作用;利用NF-κB反应性报告细胞株HEK-不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP),观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响.Wistar大鼠96只,随机分为对照组、创伤性炎症组、
【机 构】
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400042,重庆,第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室,400042,重庆,第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究
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目的 探讨核因子(NF)-κB圈套寡核苷酸(ODN)对NF-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响. 方法利用电泳迁移率改变实验(EMSA),测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF-κB的DNA结合能力的竞争抑制作用;利用NF-κB反应性报告细胞株HEK-不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP),观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响.Wistar大鼠96只,随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组.利用EMSA检测各组肝脏组织NF-κB的DNA结合活性,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝脏组织TNF-α、白细胞介素-6(IL-6) mRNA水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6的蛋白水平. 结果设计的环状哑铃形圈套ODN对NF-κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用,1 μg/ml和2 μg/ml圈套ODN瞬时转染HEK-d2EGFP,可明显抑制p65蛋白诱导的d2EGFP表达.大鼠创伤性炎症后3 h,肝脏NF-κB活性开始升高,伤后12 h达高峰.肝脏组织TNF-α、IL-6 mRNA水平和蛋白水平也明显上升,与NF-κB的活性改变一致.圈套ODN治疗后,大鼠肝脏组织TNF-α、IL-6的表达明显下降,肝脏功能明显好转,而无关ODN则没有治疗效果. 结论设计的靶向NF-κB的环状哑铃形圈套ODN可通过特异性抑制NF-κB活性,有效阻止创伤性炎症大鼠肝脏炎症介质TNF-α、IL-6的释放,从而改善肝脏功能。
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