【摘 要】
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对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用.利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET
【机 构】
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浙江理工大学生物化学研究所,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018
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对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用.利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1.以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在E.coli中表达的人血清PON1蛋白.推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能.进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要.
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