【摘 要】
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目的:探讨下调亚铁血红素合成酶(ALAS2)对线粒体自噬受体BNIP3L的作用及对K562细胞红系分化的影响.方法:通过慢病毒转染干扰ALAS2的表达,实时荧光定量PCR鉴定转染效率.采用流
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院儿科,广东省恶性肿瘤表观遗传和基因调控重点实验室,广东广州510120
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目的:探讨下调亚铁血红素合成酶(ALAS2)对线粒体自噬受体BNIP3L的作用及对K562细胞红系分化的影响.方法:通过慢病毒转染干扰ALAS2的表达,实时荧光定量PCR鉴定转染效率.采用流式细胞术检测K562细胞凋亡、细胞分化、线粒体膜电位、活性氧(ROS)水平,氯化血红素诱导K562细胞红系分化;蛋白免疫印迹法检测BNIP3L的表达.免疫共沉淀检测ALAS2与BNIP3L蛋白的相互作用.结果:与病毒空载对照组比较,ALAS2干扰组的BNIP3L mRNA和蛋白表达下降(P＜0.01),转录因子GATA1、Nrf2表达下调,活性氧水平降低(P＜0.05).病毒空载对照组线粒体膜电位低于ALAS2干扰组(P＜0.05),2组的细胞凋亡率无明显差异.氯化血红素诱导细胞分化96 h,ALAS2干扰组BNIP3L表达增加且高于病毒空载对照组,病毒空载对照组和ALAS2干扰组的CD71highCD235ahigh+ CD71lowCD235ahigh细胞比例分别为53.5％和92.9％.ALAS2与BNIP3L蛋白无直接相互作用.结论:细胞内亚铁血红素水平影响BNIP3L表达,这可能与活性氧及转录因子的调节有关.BNIP3L低表达能减少细胞凋亡,而高表达则有利于红系分化.
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