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摘要：[目的] 探讨一种绿茶浸提物的最佳提取工艺及其抗氧化活性。[方法]以保定市售绿茶为研究对象，通过对不同浸提时间、浸提温度与料液比等浸提条件对浸提效果影响得出绿茶浸提物的最佳提取工艺并鉴定提取物的抗氧化活性。[结果]试验表明，绿茶在提取时间为30 min，料液比为1∶20 g/ml，提取温度为80 ℃时，具有最佳的提取效果。通过在豆油中的抗氧化活性研究表明，提取物有着比维生素E强的抗氧化性。[结论]研究可为绿茶资源的进一步开发利用提供参考。
关键词：绿茶；绿茶浸提物；最佳提取工艺；抗氧化性
中图分类号：S571 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）08-252-01
绿茶又被称作不发酵茶。以茶多酚为主的绿茶浸提物含有丰富的儿茶素等多酚类化合物，是茶叶中主要的起生理活性和药理作用的物质，其浸提物的提取对茶资源的开发和研究有着很大的促进作用[1]。笔者根据不同的条件对绿茶中的抗氧化物质进行浸提，确定了最佳提取方案，并对浸提物的抗氧化作用做了初步的验证，证明其有良好的抗氧化作用[2]。研究确定的最佳提取方案可应用于试验研究以及化工生产，可以免去一些不必要的测试、鉴定等。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂。 75%乙醇，氯仿，乙酸乙酯，冰乙酸，维生素，可溶性淀粉，碘化钾植酸，冰乙酸，酒石酸。
1.1.2 主要仪器及用具。
万能粉碎机（FW-80），恒温水浴锅（HH-S6），电子分析天平（BS224S），离心机（TD25-WS），鼓风干燥箱（DHG-9245A），烧杯，试管，量筒，分液漏斗，滴定管等。
1.2 方法
1.2.1 绿茶浸提物的提取。先取100 g绿茶用万能粉碎机粉碎，再取1 500 ml 75%乙醇备用。
根据以往研究可知，影响提取效果的因素主要有加热温度、加热时间以及加热时的料液比等。分别以不同的提取温度、不同的提取时间以及料液比做3个单因素试验，来验证不同条件对绿茶浸提效果的影响[3]。
1.2.2 浸提物的纯化。
将绿茶粗提物在2 000 r/min离心2 min，弃掉沉淀后加入等体积的氯仿对溶液进行萃取。振荡、静置分层后取出上层水相。向水相中加入等量的乙酸乙酯。振荡、静置分层后取下层有机相。乙酸乙酯易挥发，加热有机相使其蒸发结晶，最后得到纯度较高的绿茶提取物[4]。
1.2.3 绿茶浸提物抗氧化研究。利用浸提物对豆油的抗氧化作用来检验浸提物抗氧化能力[5]。将150 g豆油与100 mg硫酸亚铁混合等量分成5组，其中1组作为对照，另外4组分别加入：① 6 mg绿茶浸提物，② 6 mg维生素E，③ 6 mg绿茶浸提物和6 mg酒石酸，④ 6 mg绿茶浸提物和6 mg植酸。将5组样品于65 ℃，无光条件下放置。每3 d测量一次豆油的抗氧化值，称取样品3 g，加入30 ml三氯甲烷-冰乙酸混合液并立即摇动使其溶解，然后加入1 ml饱和KI溶液，加塞后轻微振荡30 s，置于暗处3 min。
静置后取出样品并加入100 ml的水，轻轻摇晃，立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定样品，滴定至淡黄色后，向样品中加入1 ml的淀粉指示剂，继续滴定样品，滴定至蓝色时油脂氧化时会在油脂当中产生一些氧化物质，这些物质的氧化性可以将碘离子氧化成碘，而碘可以使淀粉溶液变蓝。当用硫代硫酸钠滴定时，这些碘又变成碘离子，而蓝色也随之消失。
滴定硫代硫酸钠的体积用于油脂的过氧化值（PV）的计算：
PV = 1 000（V-Vo）C/m
式中，V，滴定的硫代硫酸钠体积（ml）；
Vo，空白组消耗的硫代硫酸钠体积（ml）；
C，硫代硫酸钠的浓度（mol/l）；m，油脂试样的质量（g）。
2 结果与分析
2.1 不同浸提条件对浸提效果的影响
2.1.1 最佳提取温度。
通常提取效果与提取温度成正比，但是过高温度的提取会降低提取效果。固定料液比与提取时间，分别对不同提取温度的绿茶进行浸提。
取5份10 g茶叶粉末，将绿茶粉末与200 ml 75%乙醇混合、搅拌、静置后，分别在50、60、70、80、90 ℃的水浴锅中提取30 min。2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。
试验得出，提取温度50、60、70、80、90 ℃时，浸提物提取率依次为5.9%、6.7%、7.5%、8.4%、10.3%。由此可知，当提取时间和料液比固定的情况下，浸提物提取率是随着提取温度的升高而递增，但是当提取温度90 ℃时，由于加热温度过高，会导致提取物的抗氧化活性丧失[6]，所以绿茶浸提物的最佳提取温度为80 ℃。
2.1.2 最佳提取时间。确定最佳提取温度后，在这个提取温度下，固定料液比，对不同温度下的绿茶进行浸提。
取5份10 g茶叶粉末，将绿茶粉末与200 ml 75%的乙醇混合、搅拌、静置后，在80 ℃的水浴锅中分别加热10、20、30、40、50 min。2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。
试验得出，当提取时间为10、20、30、40、50 min时，浸提物提取率依次为6.1%、6.9%、7.9%、7.1%、6.5%。由此可知，当料液比和提取温度固定的情况下，改变提取时间对最后得到的提取率的影响较小，提取率先是随着提取时间的增加而增加，但当提取时间超过30 min后，随着提取时间的增加，提取率减小。由结果比较得出，当料液比和提取温度2个条件确定时，最佳提取时间为30 min。
2.1.3 最佳提取料液比。
取5份10 g茶叶粉末，分别与75%的乙醇100、150、200、250、300 ml（即料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g/ml）混合、搅拌、静置后，在80 ℃的水浴锅中分别加热30 min，2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。 试验得出，当料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g/ml时，浸提物提取率依次为6.2%、7.3%、8.2%、6.8%、5.6%。由此可知，当提取时间和提取温度固定的情况下，逐步增加料液比中溶剂用量会改变影响提取的效果，初步增加液料比中溶剂用量时可以增加提取率，当料液比小于1∶20后，随着料液比中溶剂用量的增加，提取率逐渐减少。这是由于浸提物混合物中不同物质的不同溶解度造成的，所以当提取温度和提取时间确定时，最佳液料比为1∶20 g/ml。
2.2 绿茶浸提物与普通抗氧化物的抗氧化效果的比较 由表1可知，对照组是所有样品中过氧化值最高的，当在样品中加入绿茶提取物和维生素E等抗氧化物后，过氧化值有着不同水平的降低。数据表明，添加绿茶浸提物的样品过氧化值低于添加维生素的样品，这证明了绿茶浸提物有着比维生素E强的抗氧化性。酒石酸与植酸的添加可增强茶多酚在油脂中的抗氧化能力。根据试验数据得知，植酸促进茶多酚抗氧化的能力要优于酒石酸。
3 结论与讨论
通过试验验证绿茶茶多酚最佳提取条件为80 ℃，浸提时间为30 min，料液比为1∶20 g/ml。而通过对豆油的抗氧化试验可以看出，绿茶浸提物抗氧化能力比维生素E高出数倍，有着较好的抗氧化力，而对比植酸和酒石酸对浸提物的看氧化促进能力来看，植酸有着较好的促进能力。
根据在油脂中测量的抗氧化值可知，以茶多酚为主绿茶浸提物有着比维生素E强的抗氧化性；在试验中最大提取率达到10%，证实茶多酚等抗氧化物在绿茶中的含量是比较高的，这是绿茶有着较高的保健价值的因素之一。
参考文献
[1] 潘根生.茶叶大全[M].北京：中国农业出版社，1995：89-217.
[2] 赵大洲，石蓓梅，叶主红.茶多酚水提与醇提比较研究[J].食品开发与研究，2007，28（8）：69-71.
[3] 王洪新，戴军，张家俪，等.茶叶儿茶素单体的分离纯化及鉴定[J].无锡轻工业大学学报，2001，20（2）：117-121.
[4] 王玉春.茶多酚的提取方法及应用研究进展[J].甘肃联合大学学报，2008，22（3）：51-55.
[5] 熊何建，胡慰望，谢笔钧.茶多酚分离制备的新工艺[J].食品工艺科技，1997（6）：34-36.
[6] 董文斌，胡英.茶多酚的制备工艺及研究现状[J].西北轻工业学院学报，2002，20（4）：18-24.
关键词：绿茶；绿茶浸提物；最佳提取工艺；抗氧化性
中图分类号：S571 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）08-252-01
绿茶又被称作不发酵茶。以茶多酚为主的绿茶浸提物含有丰富的儿茶素等多酚类化合物，是茶叶中主要的起生理活性和药理作用的物质，其浸提物的提取对茶资源的开发和研究有着很大的促进作用[1]。笔者根据不同的条件对绿茶中的抗氧化物质进行浸提，确定了最佳提取方案，并对浸提物的抗氧化作用做了初步的验证，证明其有良好的抗氧化作用[2]。研究确定的最佳提取方案可应用于试验研究以及化工生产，可以免去一些不必要的测试、鉴定等。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂。 75%乙醇，氯仿，乙酸乙酯，冰乙酸，维生素，可溶性淀粉，碘化钾植酸，冰乙酸，酒石酸。
1.1.2 主要仪器及用具。
万能粉碎机（FW-80），恒温水浴锅（HH-S6），电子分析天平（BS224S），离心机（TD25-WS），鼓风干燥箱（DHG-9245A），烧杯，试管，量筒，分液漏斗，滴定管等。
1.2 方法
1.2.1 绿茶浸提物的提取。先取100 g绿茶用万能粉碎机粉碎，再取1 500 ml 75%乙醇备用。
根据以往研究可知，影响提取效果的因素主要有加热温度、加热时间以及加热时的料液比等。分别以不同的提取温度、不同的提取时间以及料液比做3个单因素试验，来验证不同条件对绿茶浸提效果的影响[3]。
1.2.2 浸提物的纯化。
将绿茶粗提物在2 000 r/min离心2 min，弃掉沉淀后加入等体积的氯仿对溶液进行萃取。振荡、静置分层后取出上层水相。向水相中加入等量的乙酸乙酯。振荡、静置分层后取下层有机相。乙酸乙酯易挥发，加热有机相使其蒸发结晶，最后得到纯度较高的绿茶提取物[4]。
1.2.3 绿茶浸提物抗氧化研究。利用浸提物对豆油的抗氧化作用来检验浸提物抗氧化能力[5]。将150 g豆油与100 mg硫酸亚铁混合等量分成5组，其中1组作为对照，另外4组分别加入：① 6 mg绿茶浸提物，② 6 mg维生素E，③ 6 mg绿茶浸提物和6 mg酒石酸，④ 6 mg绿茶浸提物和6 mg植酸。将5组样品于65 ℃，无光条件下放置。每3 d测量一次豆油的抗氧化值，称取样品3 g，加入30 ml三氯甲烷-冰乙酸混合液并立即摇动使其溶解，然后加入1 ml饱和KI溶液，加塞后轻微振荡30 s，置于暗处3 min。
静置后取出样品并加入100 ml的水，轻轻摇晃，立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定样品，滴定至淡黄色后，向样品中加入1 ml的淀粉指示剂，继续滴定样品，滴定至蓝色时油脂氧化时会在油脂当中产生一些氧化物质，这些物质的氧化性可以将碘离子氧化成碘，而碘可以使淀粉溶液变蓝。当用硫代硫酸钠滴定时，这些碘又变成碘离子，而蓝色也随之消失。
滴定硫代硫酸钠的体积用于油脂的过氧化值（PV）的计算：
PV = 1 000（V-Vo）C/m
式中，V，滴定的硫代硫酸钠体积（ml）；
Vo，空白组消耗的硫代硫酸钠体积（ml）；
C，硫代硫酸钠的浓度（mol/l）；m，油脂试样的质量（g）。
2 结果与分析
2.1 不同浸提条件对浸提效果的影响
2.1.1 最佳提取温度。
通常提取效果与提取温度成正比，但是过高温度的提取会降低提取效果。固定料液比与提取时间，分别对不同提取温度的绿茶进行浸提。
取5份10 g茶叶粉末，将绿茶粉末与200 ml 75%乙醇混合、搅拌、静置后，分别在50、60、70、80、90 ℃的水浴锅中提取30 min。2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。
试验得出，提取温度50、60、70、80、90 ℃时，浸提物提取率依次为5.9%、6.7%、7.5%、8.4%、10.3%。由此可知，当提取时间和料液比固定的情况下，浸提物提取率是随着提取温度的升高而递增，但是当提取温度90 ℃时，由于加热温度过高，会导致提取物的抗氧化活性丧失[6]，所以绿茶浸提物的最佳提取温度为80 ℃。
2.1.2 最佳提取时间。确定最佳提取温度后，在这个提取温度下，固定料液比，对不同温度下的绿茶进行浸提。
取5份10 g茶叶粉末，将绿茶粉末与200 ml 75%的乙醇混合、搅拌、静置后，在80 ℃的水浴锅中分别加热10、20、30、40、50 min。2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。
试验得出，当提取时间为10、20、30、40、50 min时，浸提物提取率依次为6.1%、6.9%、7.9%、7.1%、6.5%。由此可知，当料液比和提取温度固定的情况下，改变提取时间对最后得到的提取率的影响较小，提取率先是随着提取时间的增加而增加，但当提取时间超过30 min后，随着提取时间的增加，提取率减小。由结果比较得出，当料液比和提取温度2个条件确定时，最佳提取时间为30 min。
2.1.3 最佳提取料液比。
取5份10 g茶叶粉末，分别与75%的乙醇100、150、200、250、300 ml（即料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g/ml）混合、搅拌、静置后，在80 ℃的水浴锅中分别加热30 min，2次重复试验，取3次试验提取率的平均值。 试验得出，当料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g/ml时，浸提物提取率依次为6.2%、7.3%、8.2%、6.8%、5.6%。由此可知，当提取时间和提取温度固定的情况下，逐步增加料液比中溶剂用量会改变影响提取的效果，初步增加液料比中溶剂用量时可以增加提取率，当料液比小于1∶20后，随着料液比中溶剂用量的增加，提取率逐渐减少。这是由于浸提物混合物中不同物质的不同溶解度造成的，所以当提取温度和提取时间确定时，最佳液料比为1∶20 g/ml。
2.2 绿茶浸提物与普通抗氧化物的抗氧化效果的比较 由表1可知，对照组是所有样品中过氧化值最高的，当在样品中加入绿茶提取物和维生素E等抗氧化物后，过氧化值有着不同水平的降低。数据表明，添加绿茶浸提物的样品过氧化值低于添加维生素的样品，这证明了绿茶浸提物有着比维生素E强的抗氧化性。酒石酸与植酸的添加可增强茶多酚在油脂中的抗氧化能力。根据试验数据得知，植酸促进茶多酚抗氧化的能力要优于酒石酸。
3 结论与讨论
通过试验验证绿茶茶多酚最佳提取条件为80 ℃，浸提时间为30 min，料液比为1∶20 g/ml。而通过对豆油的抗氧化试验可以看出，绿茶浸提物抗氧化能力比维生素E高出数倍，有着较好的抗氧化力，而对比植酸和酒石酸对浸提物的看氧化促进能力来看，植酸有着较好的促进能力。
根据在油脂中测量的抗氧化值可知，以茶多酚为主绿茶浸提物有着比维生素E强的抗氧化性；在试验中最大提取率达到10%，证实茶多酚等抗氧化物在绿茶中的含量是比较高的，这是绿茶有着较高的保健价值的因素之一。
参考文献
[1] 潘根生.茶叶大全[M].北京：中国农业出版社，1995：89-217.
[2] 赵大洲，石蓓梅，叶主红.茶多酚水提与醇提比较研究[J].食品开发与研究，2007，28（8）：69-71.
[3] 王洪新，戴军，张家俪，等.茶叶儿茶素单体的分离纯化及鉴定[J].无锡轻工业大学学报，2001，20（2）：117-121.
[4] 王玉春.茶多酚的提取方法及应用研究进展[J].甘肃联合大学学报，2008，22（3）：51-55.
[5] 熊何建，胡慰望，谢笔钧.茶多酚分离制备的新工艺[J].食品工艺科技，1997（6）：34-36.
[6] 董文斌，胡英.茶多酚的制备工艺及研究现状[J].西北轻工业学院学报，2002，20（4）：18-24.