【摘 要】
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利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg2+、Mn2+得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a（+）重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（31471615）
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利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg2+、Mn2+得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a（+）重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5%,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41%.序列分析表明:plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是Y97 C、P98S、X228 L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是P46 L、Q58 L、N136 D、H233 R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材.
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