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摘要：胆酸是一种固醇，是人类四种主要胆汁酸中含量最丰富的一种，作为牛、羊等动物胆汁中的主要有效成分，具有解热、抗菌、抗炎等作用，它存在于动物胆汁中，少数以游离状态存在，大多数与甘氨酸或牛磺酸结合为酰胺，生物体内的胆酸是从胆甾醇转化生成的。文章对胆酸类药物的HPLC分析测定方法以及临床应用进行综合评述。
关键词：胆酸类;HPLC;临床应用
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）06-205-01
1 胆酸类物质的研究现状
牛黄的有效成分主要包括胆汁酸、胆红素、牛磺酸、甘氨酸及多种微量元素等。胆酸类物质，如猪去氧胆酸（HDCA）、牛磺熊去氧胆酸 （TUDCA）、熊去氧胆酸 （UDCA）、牛磺酸，都得到了较广泛的研究和应用，发挥了强大的脑保护作用[1]，中医常把它用于治疗口舌生疮、咽喉肿痛、高热神昏、惊厥抽搐等病症[2]，国内外以胆酸作为原料的药物种类繁多，所以研究胆酸类药物的检测方法和临床应用具有重要意义。
2 胆酸类成分研究主要成果与存在问题
刘正明等[3]所建立的TLC及HPLC-MS/MS法检测CA的方法具有简便、快速、灵敏度高、专属性好、稳定性高等特点，适用于牛羊胆汁中CA的定性及定量测定。已有文献报道将液质联用法应用于体外培育牛黄和天然牛黄的测定[4]，但是测定胆汁酸种类少，且未对胆汁酸含量差异做可视化的模式识别分析。
3 胆酸类成分检测方法的发展
胆酸的高效液相色谱分析开始于1976年后，随着HPLC的迅速发展，在药物分析和生物分析领域日渐成熟，HPLC法逐渐成为胆汁酸分析的主要方法。?
3.1 胆酸类物质的HPLC分析方法
近年来，胆酸药物的HPLC法分析十分活跃，比如：牛磺熊去氧胆酸是熊胆汁的有效成分，而且仅在熊胆汁酸中含有，是目前发现的人体内亲水性最强的胆汁酸 ， 是熊去氧胆酸在胆汁中的生理活性形式。刘小双等[5]采用高效液相色谱法 （HPLC） 测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量 ， 该方法简便准确、精密度和重复性良好，结果准确可靠。Genta Kakiyama等[6]采用HPLC方法，用于使用非结合胆汁酸的苯酰基衍生物测量粪便胆汁酸，并将其应用于测量肝硬化患者的粪便胆汁酸。
4 胆酸类物质的临床应用
熊去氧胆酸（ UDCA） 是名贵中药熊胆的主要有效成分，主要用于胆结石、原发性硬化性胆管炎、病毒性肝炎等多种胆汁淤积性肝病的治疗，是美国 FDA 批准治疗原发性胆汁性肝硬化（ PBC） 的唯一药物[7]。UDCA 在治疗脂肪肝方面上有其独特的疗效，得到医学界广泛认可。
4.1 熊去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝
李有清[8]选取治疗的非酒精性脂肪肝患者156例，随机分成两组，观察组与对照组，对照组采用开展生活方式干预的方案，观察组采用生活方式干预基础上的熊去氧胆酸治疗方案;改变生活方式基础上的熊去氧胆酸药物治疗，可以使非酒精性脂肪肝患者有效降低 ALT、GGT、三酰甘油水平，改善肝酶学异常和胰岛素抵抗。熊去氧胆酸具有促进胆酸分泌、改变人体胆酸池组成、改善脂代谢、促进胆固醇排泄与转化;具备抗氧化、保护细胞、调节免疫力、保护肝功能的作用，熊去氧胆酸能有效缓解患者临床症状、安全性高、毒副作用小，具有降低血脂、保护肝细胞的作用，是非酒精性脂肪肝临床治疗的理想选择。
4.2 熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症
妊娠期肝内胆汁淤积症 （ICP） 是一种以胆汁酸及肝脏酶升高，皮肤瘙痒和黄疸为主要特征的妊娠并发症[9]。ICP与自发性和医源性早产，胎儿缺氧，胎粪污染的羊水和宫内死亡率增加有关[10]。熊去氧胆酸对 ICP 的治疗作用越来越被临床医生所重视，UDCA 为一种无毒、亲水性二羟基胆酸化合物，可以减少妊娠期肝内胆汁淤积症妇女的瘙痒和肝功能异常，可以促进内源性胆汁酸分泌，降低血液和肝细胞中胆酸的浓度，减轻胆汁淤积 ，抑制内源性胆酸在肠道内的重新吸收，改善肝功能，从而达到缓解孕妇症状，改善胎儿预后的作用。研究结果显示，辅以熊去氧胆酸治疗 ICP 疗效确切、明显改善了孕妇和胎儿的妊娠结局[11]。
4.3 熊去氧胆酸治疗乙型肝炎
肝硬化为临床常见慢性进行性肝病，熊去氧胆酸尚具有保护肝细胞膜和改善免疫，抗氧化作用，抑制肝細胞凋亡[12]。研究表明，对于乙型肝炎肝硬化患者，熊去氧胆酸在治疗中应用效果确切，可以促进患者肝功能、临床症状的改善，疗效独特，值得临床使用。
4.4 熊去氧胆酸联合用药
袁淑芳等[13]研究表明，熊去氧胆酸大部药物成分可被机体吸收，具有溶解胆固醇结石、保护肝细胞、消除淤胆、结合其他药物抵抗病毒等重要作用。在应用恩替卡韦强效长期抑制病毒复制基础上，加用熊去氧胆酸治疗，可明显改善慢性重型肝炎患者临床症状及肝功能、肝纤维化指标（P < 0.05），且治疗组改善情况优于对照组（P < 0.05）。熊去氧胆酸与恩替卡韦片联合用于治疗慢性重型肝炎伴胆汁淤积患者，具有保肝、利胆、退黄、降酶协同作用。可以拮抗内源性胆汁淤积导致的肝细胞毒害作用，以延缓甚至逆转肝纤维化进程。既能促进水肿肝细胞再生，又增加胆汁的排泄和运输、转化，且没有严重的不良反应，值得临床进一步研究和推广。
参考文献：
[1]徐晓琳，马重阳，王雪茜，王国力，翟昌明，岳文超，李长香，张晓瑜，沈晓东，穆杰，王庆国，程发峰. 牛黄中胆酸类成分改善大鼠脑缺血再灌注损伤及调节内质网应激作用比较[J]. 药物评价研究，2017，40（01）：11-19.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社，2015：53. [3]刘正明. 牛羊胆汁中提取胆酸的中试试验及胆酸HPLC-MS/MS测定方法的建立[D].内蒙古农业大学，2017.
[4]Liu Y， Tan P， Liu S， et al. A new method for identification of natural， artificial and in vitro cultured Calculus bovis using high-performance liquid chromatography-mass spectrometry [J]. Pharmacogn Mag， 2015， 11（42）： 304-310.
[5]刘小双，蒲旭峰，欧世荣，杨蕊. HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量的临床分析[J]. 中国现代药物应用，2015，9（16）：270-271.
[6]Kakiyama， G. et al. A simple and accurate HPLC method for fecal bile acid profile in healthy and cirrhotic subjects： validation by GC-MS and LC-MS. J. Lipid Res. 55， 978–990 （2014）.
[7]谢强，王坤，陶家林. 熊去氧胆酸生产中相關物质的分析[J]. 合成化学，2017，25（02）：152-154+158.
[8]李有清. 熊去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝的效果分析[J]. 现代消化及介入诊疗，2016，21（01）：118-120.
[9]殷俊峰 . 熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症疗效观察 [J]. 深圳中西医结合杂志，2016，26 （ 5） ： 94-96.?
[10]Chappell， L. C. et al. Ursodeoxycholic acid versus placebo in the treatment of women with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP） to improve perinatal outcomes： protocol for a randomised controlled trial （PITCHES）. Trials 19， 657 （2018）.
[11]许镇 . 熊去氧胆酸治疗肝内胆汁淤积症临床观察研究 [J]. 安徽医药，2016，14 （ 7） ： 826-828.?
[12]Ozel Coskun BD，Yucesoy M，Gursoy S，et al. Effects of ursodeoxycholic acid therapy on carotid intima media thickness，apolipoprotein A1，apolipoprotein B，and apoli- poprotein B / A1 ratio in nonalcoholic steatohepatitis[J]. Eur J Gastroenterol Hepatol，2015，27（ 2） ： 142-149.
[13]袁淑芳，阿依夏木古丽·沙得尔，王晴晴，刘志英，张跃新. 熊去氧胆酸联合恩替卡韦治疗慢性重型肝炎伴胆汁淤积患者疗效分析[J]. 中国药物应用与监测，2018，15（04）：201-203+222.
关键词：胆酸类;HPLC;临床应用
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）06-205-01
1 胆酸类物质的研究现状
牛黄的有效成分主要包括胆汁酸、胆红素、牛磺酸、甘氨酸及多种微量元素等。胆酸类物质，如猪去氧胆酸（HDCA）、牛磺熊去氧胆酸 （TUDCA）、熊去氧胆酸 （UDCA）、牛磺酸，都得到了较广泛的研究和应用，发挥了强大的脑保护作用[1]，中医常把它用于治疗口舌生疮、咽喉肿痛、高热神昏、惊厥抽搐等病症[2]，国内外以胆酸作为原料的药物种类繁多，所以研究胆酸类药物的检测方法和临床应用具有重要意义。
2 胆酸类成分研究主要成果与存在问题
刘正明等[3]所建立的TLC及HPLC-MS/MS法检测CA的方法具有简便、快速、灵敏度高、专属性好、稳定性高等特点，适用于牛羊胆汁中CA的定性及定量测定。已有文献报道将液质联用法应用于体外培育牛黄和天然牛黄的测定[4]，但是测定胆汁酸种类少，且未对胆汁酸含量差异做可视化的模式识别分析。
3 胆酸类成分检测方法的发展
胆酸的高效液相色谱分析开始于1976年后，随着HPLC的迅速发展，在药物分析和生物分析领域日渐成熟，HPLC法逐渐成为胆汁酸分析的主要方法。?
3.1 胆酸类物质的HPLC分析方法
近年来，胆酸药物的HPLC法分析十分活跃，比如：牛磺熊去氧胆酸是熊胆汁的有效成分，而且仅在熊胆汁酸中含有，是目前发现的人体内亲水性最强的胆汁酸 ， 是熊去氧胆酸在胆汁中的生理活性形式。刘小双等[5]采用高效液相色谱法 （HPLC） 测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量 ， 该方法简便准确、精密度和重复性良好，结果准确可靠。Genta Kakiyama等[6]采用HPLC方法，用于使用非结合胆汁酸的苯酰基衍生物测量粪便胆汁酸，并将其应用于测量肝硬化患者的粪便胆汁酸。
4 胆酸类物质的临床应用
熊去氧胆酸（ UDCA） 是名贵中药熊胆的主要有效成分，主要用于胆结石、原发性硬化性胆管炎、病毒性肝炎等多种胆汁淤积性肝病的治疗，是美国 FDA 批准治疗原发性胆汁性肝硬化（ PBC） 的唯一药物[7]。UDCA 在治疗脂肪肝方面上有其独特的疗效，得到医学界广泛认可。
4.1 熊去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝
李有清[8]选取治疗的非酒精性脂肪肝患者156例，随机分成两组，观察组与对照组，对照组采用开展生活方式干预的方案，观察组采用生活方式干预基础上的熊去氧胆酸治疗方案;改变生活方式基础上的熊去氧胆酸药物治疗，可以使非酒精性脂肪肝患者有效降低 ALT、GGT、三酰甘油水平，改善肝酶学异常和胰岛素抵抗。熊去氧胆酸具有促进胆酸分泌、改变人体胆酸池组成、改善脂代谢、促进胆固醇排泄与转化;具备抗氧化、保护细胞、调节免疫力、保护肝功能的作用，熊去氧胆酸能有效缓解患者临床症状、安全性高、毒副作用小，具有降低血脂、保护肝细胞的作用，是非酒精性脂肪肝临床治疗的理想选择。
4.2 熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症
妊娠期肝内胆汁淤积症 （ICP） 是一种以胆汁酸及肝脏酶升高，皮肤瘙痒和黄疸为主要特征的妊娠并发症[9]。ICP与自发性和医源性早产，胎儿缺氧，胎粪污染的羊水和宫内死亡率增加有关[10]。熊去氧胆酸对 ICP 的治疗作用越来越被临床医生所重视，UDCA 为一种无毒、亲水性二羟基胆酸化合物，可以减少妊娠期肝内胆汁淤积症妇女的瘙痒和肝功能异常，可以促进内源性胆汁酸分泌，降低血液和肝细胞中胆酸的浓度，减轻胆汁淤积 ，抑制内源性胆酸在肠道内的重新吸收，改善肝功能，从而达到缓解孕妇症状，改善胎儿预后的作用。研究结果显示，辅以熊去氧胆酸治疗 ICP 疗效确切、明显改善了孕妇和胎儿的妊娠结局[11]。
4.3 熊去氧胆酸治疗乙型肝炎
肝硬化为临床常见慢性进行性肝病，熊去氧胆酸尚具有保护肝细胞膜和改善免疫，抗氧化作用，抑制肝細胞凋亡[12]。研究表明，对于乙型肝炎肝硬化患者，熊去氧胆酸在治疗中应用效果确切，可以促进患者肝功能、临床症状的改善，疗效独特，值得临床使用。
4.4 熊去氧胆酸联合用药
袁淑芳等[13]研究表明，熊去氧胆酸大部药物成分可被机体吸收，具有溶解胆固醇结石、保护肝细胞、消除淤胆、结合其他药物抵抗病毒等重要作用。在应用恩替卡韦强效长期抑制病毒复制基础上，加用熊去氧胆酸治疗，可明显改善慢性重型肝炎患者临床症状及肝功能、肝纤维化指标（P < 0.05），且治疗组改善情况优于对照组（P < 0.05）。熊去氧胆酸与恩替卡韦片联合用于治疗慢性重型肝炎伴胆汁淤积患者，具有保肝、利胆、退黄、降酶协同作用。可以拮抗内源性胆汁淤积导致的肝细胞毒害作用，以延缓甚至逆转肝纤维化进程。既能促进水肿肝细胞再生，又增加胆汁的排泄和运输、转化，且没有严重的不良反应，值得临床进一步研究和推广。
参考文献：
[1]徐晓琳，马重阳，王雪茜，王国力，翟昌明，岳文超，李长香，张晓瑜，沈晓东，穆杰，王庆国，程发峰. 牛黄中胆酸类成分改善大鼠脑缺血再灌注损伤及调节内质网应激作用比较[J]. 药物评价研究，2017，40（01）：11-19.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社，2015：53. [3]刘正明. 牛羊胆汁中提取胆酸的中试试验及胆酸HPLC-MS/MS测定方法的建立[D].内蒙古农业大学，2017.
[4]Liu Y， Tan P， Liu S， et al. A new method for identification of natural， artificial and in vitro cultured Calculus bovis using high-performance liquid chromatography-mass spectrometry [J]. Pharmacogn Mag， 2015， 11（42）： 304-310.
[5]刘小双，蒲旭峰，欧世荣，杨蕊. HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量的临床分析[J]. 中国现代药物应用，2015，9（16）：270-271.
[6]Kakiyama， G. et al. A simple and accurate HPLC method for fecal bile acid profile in healthy and cirrhotic subjects： validation by GC-MS and LC-MS. J. Lipid Res. 55， 978–990 （2014）.
[7]谢强，王坤，陶家林. 熊去氧胆酸生产中相關物质的分析[J]. 合成化学，2017，25（02）：152-154+158.
[8]李有清. 熊去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝的效果分析[J]. 现代消化及介入诊疗，2016，21（01）：118-120.
[9]殷俊峰 . 熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症疗效观察 [J]. 深圳中西医结合杂志，2016，26 （ 5） ： 94-96.?
[10]Chappell， L. C. et al. Ursodeoxycholic acid versus placebo in the treatment of women with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP） to improve perinatal outcomes： protocol for a randomised controlled trial （PITCHES）. Trials 19， 657 （2018）.
[11]许镇 . 熊去氧胆酸治疗肝内胆汁淤积症临床观察研究 [J]. 安徽医药，2016，14 （ 7） ： 826-828.?
[12]Ozel Coskun BD，Yucesoy M，Gursoy S，et al. Effects of ursodeoxycholic acid therapy on carotid intima media thickness，apolipoprotein A1，apolipoprotein B，and apoli- poprotein B / A1 ratio in nonalcoholic steatohepatitis[J]. Eur J Gastroenterol Hepatol，2015，27（ 2） ： 142-149.
[13]袁淑芳，阿依夏木古丽·沙得尔，王晴晴，刘志英，张跃新. 熊去氧胆酸联合恩替卡韦治疗慢性重型肝炎伴胆汁淤积患者疗效分析[J]. 中国药物应用与监测，2018，15（04）：201-203+222.