【摘 要】
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目的 探究microRNA-6852(miR-6852)对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的作用及其可能的作用机制.方法 体外培养人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞SW480,X射线满射野照射细胞.使用miRNA阴性对照(miR-NC)、过表达载体阴性对照(oe-NC)、shRNA阴性对照(sh-NC)、miR-6852-mimic、淋巴细胞增强因子(LEF1)过表达载体(oe-LEF1)和醛酮还原酶1C3(AKRIC3)特异性shRNA(sh-AKR1C3)转染细胞.qRT-PCR和Weste
【机 构】
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海南省肿瘤医院药剂科,海南 海口 570100
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目的 探究microRNA-6852(miR-6852)对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的作用及其可能的作用机制.方法 体外培养人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞SW480,X射线满射野照射细胞.使用miRNA阴性对照(miR-NC)、过表达载体阴性对照(oe-NC)、shRNA阴性对照(sh-NC)、miR-6852-mimic、淋巴细胞增强因子(LEF1)过表达载体(oe-LEF1)和醛酮还原酶1C3(AKRIC3)特异性shRNA(sh-AKR1C3)转染细胞.qRT-PCR和Western blot检测细胞miR-6852、LEF1和AKR1C3表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-6852和LEF1、LEF1和AKR1 C3的靶向结合;5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;染色质免疫沉淀技术-聚合酶链式反应(ChIP-PCR)检测LEF1对AKR1 C3启动子区域的靶向结合.结果 与HCoEpiC组相比,SW480组细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1 mRNA和蛋白表达、AKR1C3 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).与空白对照组相比,2Gy组、4Gy组和6Gy组SW480细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1 mRNA和蛋白表达、AKR1C3 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).与miR-NC+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),而凋亡率明显升高(P<0.05);与miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-LEF1+6Gy组EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),而细胞凋亡率明显降低(P<0.05).与oe-NC+sh-NC+6Gy组相比,oe-LEF1+sh-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与oe-LEF1+sh-NC+6Gy组相比,oe-LEF1+sh-AKR1C3+6Gy组EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 miR-6852靶向调控LEF1/AKR1C3轴,增加结肠癌细胞SW480对放疗的敏感性.
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