【摘 要】
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目的 建立用于幽门螺杆菌快速定量检测和分型的TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR方法. 方法 采用Primer Premier 5软件分析设计引物和探针,采用双重荧光定量PCR扩增幽门螺杆菌C
【机 构】
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滨州医学院病原生物学教研室,山东烟台,264003;东营市胜利第一中学
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目的 建立用于幽门螺杆菌快速定量检测和分型的TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR方法. 方法 采用Primer Premier 5软件分析设计引物和探针,采用双重荧光定量PCR扩增幽门螺杆菌CagA和VacA基因片段,建立循环数与拷贝数关系的标准曲线.检测临床标本中所含幽门螺杆菌的循环数,用该方法对临床胃黏膜标本进行检测并与标准曲线对比,计算所含幽门螺杆菌的拷贝数. 结果 建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR方法检测幽门螺杆菌质粒的线性范围是102～108拷贝/μl,CagA和VacA基因标准曲线的相关系数分别是0.977 8和0.990 4.29份临床胃黏膜标本的CagA和VacA基因循环数Ct值分别在29～35和30～35之间,幽门螺杆菌拷贝数分别在1.0×101.39～1.0×103.87和1.0×103.06～1.0×103.91之间,且临床标本中的幽门螺杆菌均为Ⅰ型. 结论 建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR法具有敏感、精确、快速的特点,可用于幽门螺杆菌的快速定量检测与分型鉴定.
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