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目的:制备酪氨酸激酶样孤儿受体1(tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1)的全分子抗体(ROR1-IgG1)及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体(fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP),检测ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法:以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S),收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)等评估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫学活性。通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮细胞-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达,评估ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:成功制备出ROR1-IgG1和IgG1-AGAP,且能够与ROR1蛋白特异性结合;IgG1-AGAP与ROR1-IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且IgG1-AGAP组的抑制作用显著高于ROR1-IgG1组,而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明,在空白对照组、ROR1-IgG1组和IgG1-AGAP组中,Snail的表达量呈现递减趋势,而E-cadherin表达量递增,提示ROR1-IgG1和IgG1-AGAP可通过调控Snail和E-cadherin而抑制HO8910细胞发生EMT,进而抑制其迁移和侵袭能力。结论:IgG1-AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞,并具有显著的抗肿瘤活性,IgG1-AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。