香烟烟雾凝聚物通过AP-1探针调节肺泡上皮细胞γ-GCS限速酶的表达

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目的探讨香烟烟雾凝集物(CSC)对肺泡上皮细胞(CCL149)表达限速酶r-GCS的影响与机制。方法用不同浓度的CSC处理CCL149细胞1、4、8、12、24、48 h后,采用反向聚合酶链反应和W est印记法在CSC作用不同时间点检测CCL149细胞表达r-GCS的mRNA和蛋白的水平;脂质体转染及荧光素酶活性检测法测定CSC对大鼠gamm a-GCS重链(GCLC)基因5′-端启动子区域功能的影响;用EMSA法测定AP-1探针的结合水平。结果CSC可刺激CCL-149细胞表达gamm a-GCS,在一定浓度时(>1μg/m l),CCL149细胞用CSC处理后1、4、8 h组-γGCS mRNA的表达水平未见到有明显的差别;而12、24、48 h组-γGCS mRNA的表达水平较对照组明显增高(1.71±0.12 vs.0.67±0.06,P<0.05)。CSC亦能使带有GCLC 5′-端全长的荧光素酶报道基因的荧光素酶的活性增强,与无启动子的空载体对照组比较,CSC刺激后12、24、48 h组荧光素酶的活性均明显增强,其γ-GCS的活性均有升高(0.63±0.24 vs.1.75±0.27,P<0.05)。CSC尚促进AP-1与GCLC的DNA结合水平。结论CSC通过激活氧化应激敏感的转录因子AP-1上调CCL-149细胞内r-GCS的表达。
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