【摘 要】
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目的:探讨桦木酸(BEA)对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制.方法:MGC-803细胞分为对照组和不同剂量BEA组,分别采用含0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μmol·L-1 BEA的DMEM高糖培养基常规培养.采用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验和Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖率、凋亡率、迁移率和侵袭细胞数;Western blotting法检测各组MGC-803细胞中SMAD同源物7(SMAD7)、转化生长因子β受体1
【机 构】
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南华大学衡阳医学院附属第二医院普外科,湖南 衡阳 421001;南华大学衡阳医学院附属第二医院消化内科,湖南 衡阳 421001;永州职业技术学院病原生物与免疫学教研室,湖南 永州 425100
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目的:探讨桦木酸(BEA)对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制.方法:MGC-803细胞分为对照组和不同剂量BEA组,分别采用含0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μmol·L-1 BEA的DMEM高糖培养基常规培养.采用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验和Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖率、凋亡率、迁移率和侵袭细胞数;Western blotting法检测各组MGC-803细胞中SMAD同源物7(SMAD7)、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、磷酸化SMAD同源物2(p-SMAD2)、磷酸化SMAD同源物3(p-SMAD3)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Snail和Slug蛋白表达水平.结果:分别培养24、48和72 h后,与对照组比较,2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μmol·L-1 BEA组细胞增殖率明显降低(P<0.05);培养72 h后,与对照组比较,2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L-1 BEA组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);培养24 h后,与对照组比较,2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L-1 BEA组细胞迁移率明显降低(P<0.05),侵袭细胞数明显减少(P<0.05).与对照组比较,培养48 h后,20μmol·L-1 BEA组细胞中SMAD7蛋白表达水平明显升高(P<0.05),TGF-βR1、p-SMAD2、p-SMAD3、SOX4、ZEB2、MMP-9、Snail和Slug蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:BEA通过上调SMAD7表达以及抑制TGF-β/SMAD信号通路激活,调节胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.
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目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征.方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶切鉴定和测序正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-NR1D1.将pcDNA3.1空质粒和pcDNA3.1-NR1D1重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为对照组和pcDNA3.1-NR1D1转染组,48 h后提取总RNA和总蛋白样品,通过实时