论文部分内容阅读
以质粒pSVLD3为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增得到1条139bp的片段，它含有丁型肝炎病毒（HDV）基因组RNA中核酶（Ribozyme）区的cDNA，该核酶具有自身裂解功能，将此片段插入到pGEM-3Z中，经筛选、鉴定得到重组质粒pHDV108，经测序发现有2个碱基变异。以该质粒为模板，通过T7 RNA聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达71%。针对核酶唯一的自裂位点，设计并合成1条反义寡核苷酸（ASODN），当在转录反应中同时加入ASODN后，核酶的自裂率明显下降，当ASODN浓度分别为1、2、4、8和16μmol/L时，核酶的自裂率分别为28.0%、17.0%、8.0%、2.0%和0.0%，自裂抑制率分别为56.0%、73.0%、88.0%、97.0%和100.0%。结果显示ASODN可与核酶的自裂位点区结合，从而抑制核酶的自裂。