融合蛋白TAT-HIF-1α-PAS-B原核表达载体的构建、表达及纯化

来源 :第三军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zywlaoying
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目的 构建蛋白转导结构域TAT和人缺氧诱导因子1α PAS-B结构域融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 分别构建原核表达质粒pTAT-PAS-B、pET-PAS-B和pTAT-EGFP;在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内,以IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物经SDS—PAGE及Western blot分析鉴定,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果 成功构建了PAS—B结构域的原核表达载体,经过优化表达和纯化条件,融合蛋白在IPTG
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