【摘 要】
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将人类T型钙通道α1H亚单位基因(CACNA1H) cDNA转染到HEK-293(human embroyonic kidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接
【机 构】
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湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学及发育生物学教育部重点实验室,英国雷丁大学动物及微生物系
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将人类T型钙通道α1H亚单位基因(CACNA1H) cDNA转染到HEK-293(human embroyonic kidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用.RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H亚单位的过量表达.生长曲线结果表明,T型钙通道α1H亚单位基因的过量表达能显著促进HEK-293细胞增殖,将细胞群体倍增时间从对照细胞的22.1±1.1h缩短到稳定转染细胞的14.0±0.4h,细胞群体倍增时间缩短了约8h;流式细胞分析结果表明,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高,相反地处于G1期的百分率比对照细胞低,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H基因能促进细胞增殖.Western印迹结果提示,T型钙通道α1H亚单位基因表达产物是通过某种信号途径,提高了与细胞周期有关基因(CDK2、cyclin A和cyclin E)的蛋白质表达水平,从而刺激了细胞周期的进程.此研究结果有助于理解细胞增殖的机制并为开发治疗与细胞增殖异常有关疾病的新药提供了理论依据.
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