论文部分内容阅读
目的探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其相关分子机制。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组。对照siRNA组和DEK siRNA组在LipofectamineTM 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理。采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白（B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2associated X protein,Bax）表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率。结果转染48h后,DEK siRNA组DEK mRNA（0.420±0.050）和蛋白表达水平（0.311±0.038）及S期细胞比率[（20.713±1.529）%]、G2/M期细胞比率[（20.030±4.833）%]、Bcl-2蛋白表达水平（0.342±0.061）明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、（25.553±2.109）%、（26.560±4.766）%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、（24.210±2.463）%、（29.365±4.891）%、0.686±0.079]（P<0.05）,G0/G1期细胞比率[（59.257±4.767）%]、细胞凋亡率[（10.325±0.791）%]、Bax（0.610±0.038）和caspase-3蛋白表达水平（0.716±0.054）高于空白对照组[（47.887±3.753）%、（5.697±0.508）%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[（46.425±3.354）%、（6.547±0.674）%、0.340±0.045、0.321±0.049]（P<0.05）;空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论特异性DEK siRNA可针对性下调HepG2细胞中DEK基因表达,促进HepG2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关。